葛根素抑制自噬改善脂多糖诱导的小鼠肝脏损伤作用研究.doc

葛根素抑制自噬改善脂多糖诱导的小鼠肝脏损伤作用研究

摘要

葛根素抑制自噬改善脂多糖诱务必参照以下格式在稿件中补充完整基金项目5项信息（缺一不可！）。例：国家自然科学基金委员会重大课题:

务必参照以下格式在稿件中补充完整基金项目5项信息（缺一不可！）。

例：国家自然科学基金委员会重大课题:PMS肝气逆证受体基因表达及其非线性动力学特征；负责人：乔明琦。（其中立项部门：国家自然科学基金委员会；项目类型：重大课题；编号名称：PMS肝气逆证受体基因表达及其非线性动力学特征；负责人：乔明琦。）

赵裕沛1，朱益敏1，徐小勇1，贺彬婵1，闵海燕1，王嫘2收稿日期：2022-03-30修回日期：

收稿日期：2022-03-30

修回日期：2022-08-01

基金项目：国家重点研发计划专项子课题（2018YFC2002100）：老年围术期肠道微生态与预后关联机制研究，负责人：闵海燕。

通讯作者：王嫘，博士后，主要研究方向：细胞和分子免疫研究。

（1.南京中医药大学第二附属医院南京210017；2.江苏省中西医结合医院，江苏省中医药研究院南京210028）

摘要：目的观察葛根素对脂多糖（lipopolysaccharide,Lipopolysaccharide，LPS）诱导的小鼠肝脏损伤表型的改善作用，并探讨相关分子机制。方法选取18只C57BL/6J小鼠，随机分为三3组，包括：0.9%%:NaCl（腹腔注射，20mg/·kg-1）处理为对照组（6只）、LPS（腹腔注射，20mg/·kg-1）为脓毒血症肝损伤模型组模型组（6只）、及模型基础上予以葛根素（腹腔注射，160mg/·kg-1）的干预组（6只）。24小时后h后，检测小鼠血清中的丙氨酸氨基转移酶（alanineAlanineaminotransferase，ALT）和谷草转氨酶（aspartateAspartateaminotransferase，AST）水平，HE染色、免疫组化、免疫荧光检测实时定量PCR（quantitativeQuantitativereal-timepolymerasechainreactionqPCR，qRT-PCR）、蛋白质印迹法（Westernblot，WB）检测肝脏组织相关基因表达，并用人正常肝细胞株LO2验证。结果与正常对照组比，模型组小鼠的血清ALT和AST水平显著增高，肝脏组织中凋亡相关基因P53和分解半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cleavedCleavedCaspase3，cl.Cas3）表达增多，促炎因子白细胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）、γ干扰素（Interferon-γ，IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（Tumornecrosisfactorα，TNF-α）水平增加，抗炎因子白细胞介素-10（Interleukin-10，IL-10）水平降低。p62表达减少，Beclin1、LC3B表达增多。给予模型小鼠葛根素干预后，可有效逆转上述指标变化。体外实验重现上述结果。结论在LPS诱导的肝损模型中，葛根素可通过抑制自噬相关蛋白的过度表达，减少肝细胞死亡，改善小鼠的肝脏损伤病理表型，其机制可能是通过下调Toll样受体4（Toll-likereceptor4，TLR4）实现的。提示葛根素早期干预可作为一种治疗肝脏损伤的新方法。

关键词：葛根素；脂多糖；小鼠；肝脏损伤；自噬

中图分类号：R285.5

PuerarinalleviatedliverinjuryAlleviatedLiverInjuryinLPS-inducedmiceInducedMicebysuppressionSuppressionofautophagyAutophagy

Abstract

:Objective:Tostudytheeffectsofpuerarinonliverinjuryoflipopolysaccharide(LPS)inducedmiceandthepossiblemolecularmechanism.Methods：18C57BL/6Jmicewererandomlydividedintothreegroupsincludingthecontrolgroup(n==6),theliverinjurymodelgroup(n==6),andpuerarininterventiongroup(n==6).Theanimalsweretreated