2014暑期微生物实习内容-修改.doc

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微生物学假期综合教学实习

实习时间:201４年７月2日开始

实习班级：32人

生命科学技术学院微生物教研室

（第一天）微生物教学实习基本实验流程

（第一天）

配制牛肉膏固体培养基、３倍和单倍乳糖发酵液,

准备无菌水及各种器皿、器材

灭菌

灭菌

采集样品

（第二天)

（第二天)

按要求做10倍梯度稀释

按要求做10倍梯度稀释

配制伊红美兰固体和Ｅ.C液体培养基乳糖培养基初发酵试验:按实验要求将稀释液接入３倍、单倍乳糖发酵培养液

配制伊红美兰固体和Ｅ.C液体培养基

乳糖培养基初发酵试验:

按实验要求将稀释液接入３倍、单倍乳糖发酵培养液

测样品的细菌总数：

样品的稀释液涂布牛肉膏平板

3７OC培养37O

3７OC培养

37OC培养

灭菌

数平板上菌落数，计算样品的细菌总数看乳酸发酵结果,查MPN表

数平板上菌落数，计算样品的细菌总数

看乳酸发酵结果,查MPN表

（第三天）倒伊红美兰平板

（第三天）

倒伊红美兰平板

检验乳酸发酵管中产酸产气的样品guaｎ

检验乳酸发酵管中产酸产气的样品guaｎ

伊红美兰平板划线接Ｅ。Ｃ管

伊红美兰平板划线

接Ｅ。Ｃ管

4４．5OC培养３7

4４．5OC培养

３7OC培养

看结果,鉴定是否有粪大肠杆菌挑有金属光泽、无光泽的菌落（第四天)

看结果,鉴定是否有粪大肠杆菌

挑有金属光泽、无光泽的菌落

（第四天)

革兰氏染色接单倍乳糖发酵管

革兰氏染色

接单倍乳糖发酵管

3７O

3７OC培养

(第五天)看复发酵结果

(第五天)

看复发酵结果

综合本实验的六项结果（细菌总数、乳糖管初发酵（MPN）、伊红美兰平板鉴定、

E.C平板鉴定、革兰氏染色、乳糖复发酵），写出实验报告

清洗器材,并做好室内清洁。

微生物学综合教学实习

学习目的：应用所学的微生物学知识,按一定的方向，学生自己设计实验路线、实验方法，培养组织和实施实验的独立工作能力、科研思维和动手能力；建立团队成员间的合作、交流与探讨氛围。

学习内容:本实验以自来水、天然水样、食品、饮料为检测对象，考察被检测样品中的细菌总数、大肠菌群数量、基本形态及生理特征、有无粪大肠菌群等微生物学特征。对被检测样品的卫生状况做出评价。同时，通过实习熟练掌握相关的微生物技术。

背景介绍：大肠菌群并非细菌学分类命名，它不代表某一个或某一属细菌，大肠菌群是一群以大肠杆菌为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌.包括埃希氏菌属(Ｅscheｒicｈia)、柠檬酸菌属(Ｃiｔrobaｃteｒ）、肠细菌属（Eｎteroｂacter)和克雷伯氏菌属（Kleｂｓiella）等，是肠道中最普遍、数量最多的一类细菌。

饮用水和食品检疫的微生物主要是大肠菌群数.每升水中的大肠菌群数量称为大肠菌群指数。

国家饮用水标准规定：大肠菌自来水3个/L;

饮用水源＜１000个/Ｌ；?????

细菌数自来水〈１00个/ml

大肠菌群的共同特点是:发酵乳糖产酸产CO2气体.水源大肠菌群数量检测有多管发酵法（ＭPN法)和滤膜法。

在３7℃培养生长的大肠菌群,包括在粪便内生长的大肠菌群称为“总大肠菌群”(Total?ｃolｉｆoｒm）；在44．5℃仍能生长的大肠菌群，称为“粪大肠菌群(Fecaｌ?cｏliforｍ),它直接来自粪便,在44－44．5℃的高温条件下仍可生长。

在自然环境中生活的大肠菌群培养的最合适温度为25℃左右，在３7℃培养仍可生长,但温度再升高至４4。5℃,则不再生长。因此，可用提高培养温度方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分。

粪大肠菌的鉴别方法:将待测菌种接种于EC肉汤管,在４４。5±0．5℃培养2４±2ｈ。EC肉汤管中的杜氏小管中有气泡即为粪大肠菌群试验阳性；不产气管为粪大肠菌群试验阴性。

????在大肠菌群中，大肠杆菌（Eschｅriｃhｉacoli）在伊红美兰固体培养基生长时,菌落具有黑色中心，并呈现金属光泽,据此可将大肠杆菌从其他大肠菌群区分开.

实验计划：实验分五天完成:

１、分组配制培养基并准备实验所需器材。

２、初发酵接种后配E·C培养基、伊红美兰培养基。

３、观察初发酵结果并挑阳性管转E·C培养,同时作划线分离。

4、观察划线分离和Ｅ·Ｃ培养结果,并挑典型菌落转接牛肉膏斜面，然后作复发酵试验。

5、典型菌落作革兰氏染色，观察复发酵结果并撰写实验报告.

参考书目：赵斌、何绍江主编《微生物学实验》，实验107、１08。

李阜棣、喻子牛、何绍江主编《农