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第8章生物传感与DNA阵列

生物传感器是生物分析化学的一个重要领域，它结合了生命科学、分析化学、物理学和信息科学及其相关技术，能够对所需要检测的物质进行快速分析和追踪。

生物传感器，是一种对生物物质敏感并将其浓度转换为电信号进行检测的仪器。

待分析物

生物功能膜

分子识别引起的物理或化学量的变化

换能器

可测电信号

分子识别器件：酶、抗原、抗体和各种功能蛋白质、抗体酶、核酸、催化性核酸、激素、微生物细胞、细胞器、动植物组织等。

了解和掌握生物功能物质的性质及进行分子识别的特征。

1、生物反应的热力学

2、生物发光

3、显色反应

Langmuir-Biodgett（L-B）膜技术

脂双层膜

多层磷膜

固定化生物功能膜

夹心法

吸附法

共价键合法

交联法

凝胶包埋法

电子传递媒介大致有两类：①生物体内的天然介体

②非生物源介体

良好的媒介体需具有低的氧化还原电势和高的电化学反应速率并且反应可逆。

通常采用三电极实验系统：工作电极、对电极和参比电极。

利用酶或蛋白质与电极之间的直接电子传递可以不需电子传递媒介体的存在就可获得对检测对象的传感分析。

无试剂电化学生物传感器采用特殊方法将蛋白质或酶分子直接固定在固定电极表面，做氧化还原活性中心充分暴露并与电极进行直接“交流”，加快了固定化分子与电极之间的电子传递速率。

1、蛋白质在电极上的直接电化学

2、蛋白质在金胶纳米粒子修饰电极上的固定与直接电子传递

3、纳米粒子在无试剂生物传感器制备中的应用

血糖测定

乳酸测定

尿素及尿酸测定

GPT测定

免疫传感器

电化学免疫

传感器

质量检测免疫传感器

热量检测免疫传感器

光学免疫

传感器

氨基酸测定

酒精测定

维生素C与淀粉测定

过氧化氢

测定

果糖测定

DNA传感器是通过固定在感受器的表面上一直的核苷酸序列的单单链DNA分子，按照碱基互补配对的原则杂交形成双链的DNA，再经过换能器将杂交过程或者所产生的变化转化成电、光、声等物理量，并借助微电子技术分析响应信号和相关基因信息。

1、基本原理

2、DNA探针的固定

1）吸附法固定DNA

2）包埋法

3）抗生物素蛋白-生物素的配位作用固定DNA

4）共价键合固定DNA

电活性杂交指示剂分为内部指示剂和外部指示剂。内部活性指示剂是指利用DNA分子中的碱基或其他修饰基因的电活性进行检测。外部指示剂是一类具有电活性的物质，它能选择性的区分单链DNA和双链DNA。

指示剂分子与DNA之间存在3中作用方式：静电作用、沟槽作用、嵌入作用。

3、DNA杂交指示剂

4、电化学DNA传感器的应用

DNA电化学传感器是由一个固定了DNA片段(探针)的电极和检测用的电活性杂交指示剂构成。DNA探针一般是一个单链DNA片段,也可以是一条整链,长度在十几个到上千个核苷酸不等,与靶序列是互补的。通常多采用人工合成的寡聚脱氧核苷酸作为DNA探针,将这种探针分子(SSDNA)固定在电极表面构成DNA修饰电极。探针分子与其互补链杂交的高度选择性使SSDNA修饰电极具有极强的分子识别功能。在适当的条件下,电极表面的DNA探针分子能与靶序列选择性地杂交,在电极表面形成双链DNA,从而导致电极表面结构的改变。这种杂交前后的结构差异,可通过一电活性杂交指示剂来识别,这样便达到靶序列的

目的。

DNA电化学传感器主要用于靶序列的杂交检测或靶序列分析

5、直接电化学DNA生物传感

直接电化学检测无需外部杂交指示剂或对待测物的标记,缩短了检测时间,越来越受到人们的关注。原则上,直接电化学检测源于杂交后所引起的两个效应:目标序列核酸内在的氧化还原活性和界面上电化学性质的变化(例如,电容、阻抗、电导率及电荷变化)。

6、DNA电化学生物传感器的选择性

提高DNA生物传感器的选择性通常有两种主要的方法：

一是基于探针DNA的选择(PNA探针)以及杂交条件的控制

(特别是温度);

二是通过区别在完全配对与单碱基错配之间电子传递性质

的差异。

DNA微阵列又称DNA阵列或DNA芯片，比较通俗的名字是基因芯片是一块带有DNA微阵列涂层的特殊玻璃片，在数平方厘米之面积上安装数千或数万个核酸探针，经由一次测验，即可提供大量基因序列相关资讯。它是基因组学和遗传学研究的工具。研究人员应用基因芯片就可以在同一时间定量的分析大量(成千上万个)的基因表达的水平，具有快速、精确、低成本之