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siRNA干扰人肝癌细胞株HepG2生存素表达的实验研究的开题报告

1.研究背景

人类肝脏肿瘤是全球最常见的恶性肿瘤之一，其中肝癌占据了很大的比例。早期的治疗方法包括手术切除、放射治疗和化学治疗，但这些方法并不能完全控制肝癌的生长和扩散，因此，寻找更有效的治疗方法是非常必要的。

生存素是一种对细胞增殖、凋亡和生存等具有一定影响的蛋白质，其参与了细胞的功能过程。在肝癌的发生和发展中，生存素的表达水平升高，另外，其是肝癌细胞分化的基本特征之一。因此，抑制生存素的表达是一种可能的肝癌治疗方法。

siRNA是siRNA介导的RNA干扰技术的缩写，是一种基因沉默的技术，可用于抑制肝癌相关基因的表达，为研究肝癌的治疗提供了新的研究手段。

2.研究目的

本研究旨在使用siRNA干扰技术抑制HepG2细胞株中生存素的表达，以探究生存素对HepG2的生长和增殖的影响，并为肝癌的治疗提供新的研究思路。

3.研究方法

(1)建立HepG2细胞株

将HepG2细胞株接种在含有10%FBS的DMEM培养基中，维持在37℃的培养箱中，每三天一次更换培养基。

(2)siRNA干扰

使用siRNA干扰技术对HepG2细胞株中的生存素进行抑制。首先，根据生存素的序列设计3个目标siRNA，然后将它们转化为合成siRNA，并通过转染技术将siRNA导入细胞中。对于转化为合成siRNA的序列，使用西方印迹法和实时定量PCR等技术进行检测。

(3)细胞增殖实验

采用MTT实验检测细胞增殖，通过比较HepG2细胞株中siRNA干扰前后的细胞增殖情况，来评估生存素的表达对肝癌细胞增殖的影响。

4.预期结果

本研究预计可以证明siRNA干扰覆盖生存素基因可以显著抑制HepG2细胞株的生存素表达水平，并导致肝癌细胞的增殖和生长下降。这有望为发展有效的肝癌治疗方法提供新的研究思路。