实验一-苯酚的高效液相色谱法.docVIP

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实验一高效液相色谱法-紫外法测定水中的苯酚含量

一、实验目的

1、熟悉高效液相色谱仪的结构

2、掌握苯酚的高效液相色谱-紫外测定法

3、熟练掌握高效液相色谱仪的操作

二、实验原理

苯酚是最简单的酚，为无色固体，有特殊气味，显酸性。苯酚是有机化工工业的基本原料，可通过多种途径对环境水体造成污染，对人类、鱼类以及农作物带来严重危害。根据国家环保部门有关规定，工作场所苯酚的最高允许质量浓度为5×10-6μg/L，饮用水中为2μg/L，地面水中为0.1mg/L。苯酚的测量方法有多种，如溴化容量法、比色法、高效液相色谱法等。但前两种方法分析速度较慢、精度较低，高效液相色谱法是近年来发展起来的一种新技术，具有分析速度快、检测灵敏度高、操作简便、样品用量少等特点。

三、仪器和试剂

1、设备及试剂

安捷伦高效液相色谱仪1100，紫外检测器，C18色谱柱。

苯酚(分析纯)，甲醇(色谱纯)，二次蒸馏水。

2、操作条件

色谱柱为C18柱；流动相为甲醇/二次蒸馏水=80∶20(体积比)；检测波长为270nm；流速为1.0ml/min；进样量为20μL。

四、实验步骤

1、标准曲线的制备

称取纯苯酚600mg于100.0ml容量瓶中，用适量甲醇溶解，用甲醇稀释至刻度。分别吸取该溶液(单位:ml)0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0于50ml的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。得到标准系列溶液。分别采用高效液相色谱-紫外法测定标准溶液，记录色谱峰面积，以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线。

2、样品分析

将水样经过滤(0.45um滤膜)处理后，测定其峰面积值，根据标准曲线进行定量。

五、实验数据

1标准曲线的绘制

苯酚体积，V（mL）

苯酚浓度，C（mg/mL）

峰面积，A(AU)

2样品分析数据

样品

水样1

水样2

1

2

3

1

2

3

峰面积，A(AU)

浓度，C（mg/mL）

六、数据处理

仪器和试剂?1、仪器：?⑴岛津（SHIMADZU）LC-20A液相色谱仪：?①流动相：乙腈、MQ水（由铝箔纸包裹，防止其中产生藻类，堵塞进口）?②高压输液泵：并联式微体积柱塞往复泵??（Prominence?LIQUID?CHROMATOGRAPH）?型号：LC-20AD??厂家：UFLC?SHIMADZU?③色谱柱：固定相填充物：十八碳（C18）

型号：Intertsil?ODS-SP??参数：??填充物粒径：5?μm???内径××250?mm?④检测器：二极管阵列检测器（PDA）?型号：SPD-M20A???电压：230V??厂家：SHIMADZU?⑤脱气装置：?型号：DQO-20A5?⑥进样装置：高压六通进样阀??两个状态：?Load：样品进入六通阀，未入色谱柱??Inject：位于六通阀的样品进入色谱柱??种类：SIL-10A?、SIL-10Ai?、SIL-10ADVP

⑦淋洗液（洗针、洗阀）：甲醇?⑵移液管?2?mL、5?mL各一支?⑶具塞离心管10??mL一次性离心管一支?2.?试剂：甲醇（色谱纯）；?苯酚标准使用溶液（10?mg/L）??待测水样

四、实验步骤?1?标准系列配制??????mL于10?mL的具塞离心管中，用甲醇定容至5?mL，混匀。待测。?2?样品的制备?????取水样约1??mL一次性离心管中。待测。?3?色谱参数?色谱柱：C18?柱；?流动相：乙腈、水；?梯度洗脱程序：?

洗脱时间?0:00?4:00?4:01?5:00?5:01?8:00?乙腈（%）?65?65?75?75?65?65??mL/min；?柱温：室温；?进样量：20?μL；?检测器：二极管阵列检测器，检测波长280?nm

?测定?测定标准系列，再测定样品。根据标准系列中苯酚的保留时间，定性确定样品中的目标物。?记录标准系列和样品中目标物的峰面积。

五、数据记录与计算?（1）标准系列c=4mg/mL的谱图及样品的谱图：?样品谱图（图2）中，三个明显高的峰的记录数据如下表