(9)--3.2 病毒的繁殖与效价测定 美化.pptVIP

生命科学学院病毒的繁殖与效价测定

导入细菌的二均分裂酵母菌的出芽繁殖

一、噬菌体的增殖只有其两种基本成分的合成和装配。吸附侵入增殖装配释放

一、噬菌体的增殖1．吸附（Attachment）尾丝尖端与宿主细胞表面的特异性受体接触，触发尾丝散开，附着在受体上，随之把刺突、基板固定。受体（receptors）：被病毒特异性识别的细胞表面组分或结构，例如，糖蛋白、脂多糖、磷壁酸、鞭毛或性菌毛等。随机碰撞相遇吸附在细菌表面尾钉与细胞壁结合

一、噬菌体的增殖2.侵入（Penetration）尾部的酶水解细胞壁的肽聚糖，产生小孔；尾鞘收缩，核酸通过尾管压入胞内，蛋白质外壳留在胞外。吸附尾钉固着尾鞘收缩尾管穿入DNA注入

一、噬菌体的增殖3.增殖（replication）由噬菌体发出指令并提供蓝图，利用宿主的生物合成机构和场所，合成噬菌体的核酸、蛋白质和酶类。早期mRNA早期蛋白(很多种，新合成或更改的次早期RNA聚合酶)次早期mRNA次早期蛋白(DNA分解酶、DNA聚合酶、晚期mRNA聚合酶等)晚期mRNA晚期蛋白(衣壳蛋白、装配酶、溶菌酶等)核酸(DNA)复制利用宿主细胞的RNA聚合酶dsDNA噬菌体的次早期DNA晚期基因双链DNA噬菌体三阶段转录增殖示意图

一、噬菌体的增殖4、装配（Assembly）噬菌体的装配是一个极为复杂的自我组装的过程。

一、噬菌体的增殖5、释放（Release）宿主细胞经酯酶和溶菌酶等水解后裂解，释放出一群成熟的子代噬菌体。

一、噬菌体的增殖增殖周期吸附侵入合成装配释放烈性噬菌体敏感性细菌裂解性周期裂解量

噬菌体效价的测定噬菌斑是由噬菌体不断侵染宿主细胞裂解形成的透明空斑。

一个噬菌斑是由一个噬菌体形成的。噬菌体效价是指1mL样品中所含具有侵染活性的噬菌体粒子数，又叫噬菌斑形成单位(plaque-formingunit，pfu)。

测定噬菌体效价的双层平板法2-4ml上层培养基0.2ml敏感菌悬液0.1ml噬菌体试样上层培养液7-8ml培养基底层培养基37℃,10h噬菌斑噬菌体效价(pfu/mL)=噬菌斑数×10×稀释倍数混匀

小结烈性噬菌体增殖包括吸附侵入增殖成熟释放噬菌体效价的测定双层平板法

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