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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA);概念;国内外发展;分型;临床表现;致病因子;感染危险因素;MRSA的检测;琼脂筛选法:1997年NCCLS推荐的MRSA的确证试验,即MH培养基加NaCl(40g/L)加苯唑西林(6μg/ml),将菌液(0.5麦氏浊度)点种或画线35°C孵育24h,只要平皿有菌生长,即使一个菌落也是MRSA,该法敏感度为100%,常用作校正其它方法的标准,尤其适用于检测抑菌圈直径处于中介度的金黄色葡萄球菌
浓度梯度(Etest)法:1988年ABBiodisk公司推出,在含20g/LNaCl的MH琼脂平板上,贴上苯唑西林的试条,菌液调至0.5~1麦氏浊度,35°C孵育24h,直接读取MIC值。MIC2μg/ml为敏感,4μg/ml为耐药。Etest法具有精确、可靠、稳定性好的特点,但缺点是价格昂贵
自动化药敏检测:目前有Phoenix系统、Vitek系统、ATB系统、MicroScan系统、SensiterARIS等。将菌液稀释后注入药敏板或孔内,然后通过检测菌液浊度,荧光指示剂的荧光强度或荧光底物的水解反应来判读结果。其优点是快速,但有时对生长缓慢或延迟表达耐药性的MRSA,在3~4h内难以达到检测水平,容易漏检或误报MRSA。
;DNA探针杂交:对于低水平耐药或临界水平耐药的MRSA,应选该方法来检测。用特异性的mecADNA片段经地高辛标记,与可疑菌株进行杂交,有学者报告[13],DNA探针仅与MRSADNA杂交,与MSSADNA无杂交带,其特异性高于琼脂稀释法,敏感性高于肉汤稀释法,可直接用于临床标本,无需先进行细菌分离培养,但探针较贵,保存期较短。
PCR技术:根据金黄色葡萄球菌TK784的mecA基因DNA序列[14]设计一引物,再裂解提取被测菌的DNA,在一定条件下进行扩增,经琼脂糖电泳后在紫外灯下观察有无与阳性对照菌株(金黄色葡萄球菌ATCC29213)相同的区带。PCR具有较高的灵敏度,只要被测菌有微量的的基因,即出现阳性结果,因此常作为检测MRSA的参考方法。
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