GBT40472-2021 柱锈菌科实时荧光PCR检疫鉴定方法 (2).pdfVIP

ICS65.020.01

CCSB16GB

中华人民共和国国家标准

GB/T40472-2021

柱锈菌科实时荧光PCR检疫鉴定方法

DetectionandidentificationofCronartiaceaeusingreal-timePCR

2022-03-01实施

2021-08-20发布

国家市场监督管理总局也士

国家标准化管理委员会«.IIJ

GB/T40472-2021

目IJ~

本文件按照GB/T1.12020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271)提出并归口。

本文件起草单位z中华人民共和国宁波海关、中国科学院微生物研究所、中国检验检疫科学研究院、

中华人民共和国乌鲁木齐海关。

本文件主要起草人：段维军、蔡磊、赵鹏、郭立新、刘芳、李雪莲、张永江、张慧丽、王聊、陈先锋。

I

GB/T40472-2021

柱锈菌科实时荧光PCR检疫鉴定方法

1范围

本文件描述了植物病原真菌柱锈菌科的实时荧光聚合酶链式反应（以下简称实时荧光PCR）检疫

鉴定方法。

本文件适用于携带柱锈菌科病菌的植物及其产品中柱锈菌科病菌的检测筛查。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4基本信息

学名：Cronartiaceae

中文学名：柱锈菌科

分类地位：隶属于真菌界Fungi），担子菌门（Basidimycota），柄锈菌纲（Pucciniomycetes），柄锈菌

目（Pucciniales）。

传播途径：柱锈菌科主要由种苗或病残体等传播，也可经风、雨水和昆虫传播。

柱锈菌科基本信息参见附录A,

5鉴定原理

根据柱锈菌科病菌的DNA序列特征，采用实时荧光PCR方法，应用所设计引物和探针对柱锈菌

科病菌进行检测鉴定。

6仪器和试剂

6.1仪器设备、实验用具

天平、研钵、水浴锅、纯水仪、旋涡振荡器、台式离心机、紫外分光光度汁、高速冷冻离心机、冰箱、实

时荧光PCR仪、微量移液器（0.1µL~2.5µL,1µL~10µL10µL~50µL,20µL~200µL,100µL~

1000µL）。

6.2试剂

十六烧基三甲基澳化钱CCTAB）提取液（2%CTAB,1.4mol/LNaCl,20mmol/LEDTA,

100mmol/LTris•HCIpH8.0）、主要圣甲基氨基甲皖（Tris）饱和盼、三氯甲烧、异戊醇、异丙醇、元水乙

GB/T40472-2021

醇、次氯酸铀、核糖核酸酶（RNas巳）、实时荧光PCR反应预混液：2×TaqManUniversalPCR

Master肌1ix。

除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。

7检症鉴定

7.1样晶的采集与处理

挑取感病材料放置在2