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结核分枝杆菌抗体检测（胶体金法）规程操作

标准化操作规程临检室鄱阳湖第二医院检验科

结核分枝杆菌抗体检测(胶体金法)规程操作

1、检验目的

本试剂盒可定性检测人血清中结构分枝杆菌抗体，用于临床结构

病的辅助诊断。2、检验原理

本试剂盒利用斑点免疫胶体金渗滤技术（DIGFA），将结核分枝杆

菌特异性膜蛋白抗原分离纯化，点样并固化在硝酸纤维素膜上，膜上

TB抗原捕获人血清样品中结核分枝杆菌抗体，被捕获的结核IgG抗

体可用葡萄球菌A蛋白（SPA）胶体金缀合物标呈色（SPA能与IgG

特异性结合），形成红色斑点，根据是否出现红色斑点即可判断阴、

阳结果从而判断是否存在结核分枝杆菌抗体。3、样本要求

必须使用新鲜血清标本，血浆标本必须用玻璃棒剥离纤维蛋白，

保证血清无混浊沉淀。4、试剂

4.1试剂名称：结核分枝杆菌抗体诊断试剂盒（胶体金法）4.2生

产厂家：上海奥普生物医药有限公司4.3包装规格：20人份/盒

4.4贮存条件及有效期：2-8℃干燥处保存，有效期12个月。5、

检验方法：

5.1在反应板的反应孔中间，加入2滴封闭液，等待薄膜吸入；

5.2取40μl新鲜的血清标本，加入反应孔中间，等待薄膜吸入；5.3

在反应孔中间加入6滴洗活液，等待薄膜吸入；5.4在反应孔中间

加入2滴金标液，等待薄膜吸入；

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5.4在反应孔中间加入6滴洗涤液，等待薄膜吸收，目测结果；

6、结果判断

6.1阳性――质控点显示红色，反应孔中间有红色斑点出现。6.2

阴性――质控点显示红色，反应孔中间无红色斑点出现或仅为痕迹。

检验方法的局限性

少数标本（急性感染、高血脂、溶血等）可出现背景偏红，一般

不影响结果判断，可通过将标本用封闭液1:3稀释，加样80μl背景将

获得改善。严重乳糜血标本可能会阻塞硝酸纤维素膜孔，使背景很红，

影响中间红色斑点有无的判别，不宜用本法测定。7、注意事项

7.1必须以单人份操作，严禁多标本同时检测，每个标本的操作

步骤需要连续进行，不宜停顿过长。

7.2质控点显示红色表明试剂盒有效；阴、阳性对照也是确保定

性结果可靠的一个环节，但临床阳性标本显色深浅可以与阳性对照不

同。

7.3血清、包括健康人血清属潜在生物危害物质，操作者应戴手

套，测试后凡接触血清的物品应消毒后再丢弃。

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快速革兰氏染色液操作规程

1、检验目的

主要作于细菌标本涂片或菌落涂片的染色。2、检验原理

改良后的革兰氏染液不含对人体有害的石炭酸，碘液稳定无升华

现象，保存时间长，且染色无沉淀，背景清晰，阴阳结果明显，染色

结果将细菌分为革兰氏阳性（紫色）或革兰氏阴性（红色）两类。3、

试剂

3.1试剂名称：快速革兰氏染色液

4.2生产厂家：温州市康泰生物科技有限公司4.3试剂组成：

R1：结晶紫染液50ml20ml250ml100ml20mlR2：革兰氏碘液

50ml20ml250ml100ml20mlR3：脱色液100ml40ml250ml100ml

20mlR4：复染液50ml20ml250ml100ml20ml4.3包装规格：

4×100ml4×250ml4×20ml4.4储存条件及有效期：10℃-30℃储存有

效期三年。5、操作步骤：

5.1做一薄涂片，干燥后火焰固定

5.2滴加1液，夏天染1分钟、冬天染2分钟、清水冲去染液5.3

滴加2液，作用1-2分钟，水洗，并倒掉多余的水分。

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5.4加3液脱色，不时摇动（约左右摇动10―15次），至无紫色

脱落为止，水洗。

5.5加4液复染，10秒内水冲洗

5.6吸干或在空气中干后，置油镜下观察。6、结果判定

革兰氏阳性菌呈紫色革兰氏阴性菌呈红色7、注意事项

7.1结晶紫染液色时间不能太短，否则易出现假阴性或阴阳性