2024届高三生物二轮复习专项练习课件：PCR中引物专题.pptxVIP

PCR技术中“引物”分析;突破一、引物存在的必要性;优化P1421.(2023·浙江卷)某研究小组利用转基因技术,将绿色荧光蛋白基因(GFP)整合到野生型小鼠Gata3基因一端,如图甲所示。实验得到能正常表达两种蛋白质的杂合子雌雄小鼠各1只,交配以期获得Gata3-GFP基因纯合子小鼠。为了鉴定交配获得的4只新生小鼠的基因型,设计了引物1和引物2用于PCR扩增,PCR产物电泳结果如图乙所示。;例1、为研究水稻D基因的功能，研究者将T-DNA插入到D基因中，致使该基因失活，失活后的基因记为d。

（1）运用农杆菌转化法时，为鉴定筛选出的(农杆菌）菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR鉴定。图2所示为甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应位置，PCR鉴定时应选择的一对引物是__________。某学生尝试用图中另外一对引物从某一菌落的质粒中扩增出了400bp片段，原因是________________________。;实验思路：随机选取F2植株若干，提取各植株的总DNA。分别用引物“Ⅰ+Ⅲ”组合及

“Ⅱ+Ⅲ”组合进行PCR，检测是否扩增。

预期结果：若两种引物组合均可完成扩增，则相应植株的基因型为Dd；

若只有“Ⅰ+Ⅲ”组引物可完成扩增，则相应植株的基因型为dd;

若只有“Ⅱ+Ⅲ”组引物可完成扩增，则相应植株的基因型为DD;;思维拓展1：

1.若构建基因表达载体时，基因反接，可抑制相关基因的表达，简述其原理。

2.选择下图中的引物__________组合可扩增出两侧的未知序列。;优化P13010.设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如图),请分别说明理由。;引物设计一般要遵循以下原则：

（1）典型的引物长度为18-30个碱基。短的引物（15个核苷酸以下）能非常高效地结合---但是它们的专一性。非常长的引物能提高专一性，但是复性效率，从而导致PCR产物量。

（2）引物设计应避免两个引物互补结合。

（3）引物本身不能折叠配对

;优化P144(2022·山东卷)(1)为构建重组载体,需先设计引物,通过PCR特异性扩增P基因。用于扩增P基因的引物需满足的条件是______________________________________

。为使PCR产物能被限制酶切割,需在引物上添加相应的限制酶识别序列,该限制酶识别序列应添加在引物的(填“3端”或“5端”)。?;若想在DNA两侧添加限制酶识别序列，可利用PCR技术对DNA进行扩增时，在

引物A、B的端分别添加限制酶识别序列。;1．（2023·浙江·二模）下列有关生物技术与工程中所用技术操作与原理的叙述，错误的是（）A．动物细胞培养——应用酶的专一性原理可对所需材料用胰蛋白酶进行处理B．制备单克隆抗体——应用细胞膜流动性原理对脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合C．PCR技术的退火（复性）——应用碱基互补配对原理使引物结合在DNA模板链的5端D．细胞核移植——细胞质可调控细胞核基因表达，选用卵细胞质使重组细胞表现出全能性

;突破二、引物的设计与应用;考前增分练P2371.(1)研究者进行PCR扩增前根据epEGF基因设计了一对引物,据图1分析,该对引物序列的设计要求是__________________________________________

_______________________________________________________________________

和____________________________________________________________________。?

?

;考前增分练P2382.(2)培育“超级菌”。对菌株WZ改造后的CD3D基因进行研究,把CD3D基因和His标签基因(His标签由6个组氨酸组成)连接起来构建融合基因,并构建重组基因表达载体,下图为载体、CD3D基因的结构、不同限制酶的识别序列及切割位点,欲将标签基因连接在CD3D基因编码区的末端,已知组氨酸的密码子为CAU,终止密码子为UAG。

①写出His的基因编码链的碱基序列5‘--3。

②为构建融合基因并将其插入载体,科研人员设计了一对与CD3D基因编码区两端序列互补配对的引物,设计时需在引物(填“A”或“B”)的5端增加相应的限制酶识别序列和His基因的编码序列,请写