氨基酸发酵模版.docVIP

发酵法生产L-异亮氨酸的争辩进展

异亮氨酸(2-amino-3-methylvalericacid)由Ehrlich于1904年首次从甜菜糖浆中分别出来,其化学组成虽与亮氨酸一样,但理化性质各异,故命名为异亮氨酸。异亮氨酸有4种光学异构体,自然界中存在的仅为L-异亮氨酸。

哺乳动物体本身不能合成L-异亮氨酸,所以,作为人体必需的8种氨基酸之

一,成年人每天需要从外界摄取20mg/kg(体重)的L-异亮氨酸。L-异亮氨酸是合成人体激素、酶类的原料,具有促进蛋白质合成和抑制其分解的效果,在人体生命活动中起着重要作用,因此,在食品和医药行业具有广泛的应用及商业价值。食品方面,主要用于食品强化,使各种氨基酸平衡,提高食品的养分价值。在医药方面,3种支链氨基酸(缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸)组成的复合氨基酸输液以及大量用于配置治疗型特种氨基酸的药物,如肝安、肝灵口服液,对治疗脑昏迷、肝昏迷、肾病等具有显著疗效,并可取代糖代谢而供给能量,是比较昂贵的氨基酸原料药之一。近年来的争辩说明,L-异亮氨酸是一种高效的B2防范素表达的诱导物,在诱导上皮防范素表达上起着重要作用,作为一种免疫刺激物,对粘膜外表的防御屏障在临床上将起到重要的支持作用。由于L-异亮氨酸和L-缬氨酸凝胶具有带正电的端基,是型低分子量凝胶,不仅可以使纯水和含有无机酸和盐的水溶液成凝胶而且可以使有机溶剂和油成胶状,可以制备形成水凝胶,其在生物医药、组织工程、光化学、电化学、食品工业、化装品等领域已被广泛运用。在国外,还将其大量用于乳牛催乳以及饲料添加剂,以及将L-异亮氨酸添加到饮料中生产功能饮料等。

1L-异亮氨酸的生产方法

过去氨基酸都是以酸水解蛋白质制造,自1956年日本协和发酵公司用发酵法生产谷氨酸以后,氨酸的发酵生产进展很快,到目前为止,绝大多数氨基酸已能用发酵法和酶法生产。L-异亮氨酸的生产方法有提取法、化学合成法、发酵法。提取法和化学合成法由于原料来源受限制,生产本钱高,污染环境,难以实现工业化生产。微生物发酵法生产L-异亮氨酸具有原料本钱低,反响条件温存,简洁实现大规模生产等优点,是目前生产L-异亮氨酸最主要的方法。L-异亮氨酸发酵有添

加前体发酵(又称微生物转化法)和直接发酵-种方法。早期,异亮氨酸发酵是利用芽孢杆菌(Bacillus)、沙雷氏菌(Serrati)、假单孢菌(Pseudomonas)等使用葡萄糖等作为发酵碳源、能源,再添加特定的前体物质如A-氨基丁酸、A-羧基丁酸、D-苏氨酸、A-酮基异戊酸等,以避开氨基酸合成途径的反响抑制,经微生物作用将

其有效地转变为异亮氨酸。直接发酵法是借助微生物具有合成自身所需氨基酸的力量,通过菌株的诱变处理,选育出各种养分缺陷型和氨基酸构造类似物抗性突变株,如黄色短杆菌(Brevibacteriumflavum)、谷氨酸棒杆菌

(Corynebac-teriumglutamicum)、粘质赛氏杆菌(Sarratiamarcescens)、

乳糖发酵短杆菌(Brevibacteriumlactofer-mentum)、钝齿棒杆菌

(Corynebacteriumcrenatum)、大肠杆菌(Escherichiacoli)等,以解除代谢调

节中的反响抑制和阻遏,到达过量积存L-异亮氨酸的目的。2L-异亮氨酸的生物合成途径及调整

L-异亮氨酸的生物合成途径

以葡萄糖为原料生物合成L-异亮氨酸涉及到EMP、HMP、TCA、乙醛酸循环、伍德沃克曼反响,以及苏氨酸合成水平和分支链氨基酸合成水平的调把握,其生物合成途径如图1所示。

L-异亮氨酸的生物合成及代谢调控

L-异亮氨酸生物合成的根本调整机制有反响把握和在合成途径分枝点处的优先合成。在它的生物合成的主代谢流中,有5个关键酶把握其强度,它们分别受不同的代谢产物的反响调整,活化这些酶有利于异亮氨酸的生物合成。

(1)磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PC,E

PC是介于合成和分解代谢物定向途径上的第1酶,受天冬氨酸、苹果酸的反响抑制,受天冬氨酸、谷氨酸的反响阻遏,为乙酰CoA、GDP、GTP或二磷酸果糖所激活。

(2)天冬氨酸激酶(AK,E1

AK受苏氨酸和赖氨酸的协同反响抑制。通过选育赖氨酸养分缺陷型切断由天冬氨酸半醛向赖氨酸的合成途径,使代谢流更加畅通,积存中间代谢物苏氨酸,从而使终产物L-异亮氨酸积存。

(3)高丝氨酸脱氢酶(HD,EC1111113)

HD受苏氨酸的反响抑制和蛋氨酸的反响阻遏。通过选育苏氨酸构造类似物(AHV、ThrHx)抗性突变株、蛋氨酸构造类似物(Eth)抗性变株或者蛋氨酸缺陷

型可活化该酶。

(4)苏氨酸脱氨酶(TD,E1C1