酵母单杂交实验步骤总结,.docx

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pBait-AbAi载体的构建〔酵母报道子的构建〕

注:酵母报道子〔pBait-AbAi〕包含目的顺式作用元件的一个或多个拷贝,且插入到pAbAi载体AbAir报告基因的上游。大量争论说明最有效的构建应包含目的DNA三个以上的首尾连接的拷贝。首尾连接的拷贝产生方式很多,但对于长度小于20bp的调控元件,人工合成寡核苷酸是最便利牢靠的途径。

设计并合成包含目的序列的两条反向平行的寡核苷酸序列,且两端加上与pAbAi载体酶切产物全都的粘性末端〔建议合成一个目的序列的突变序列作为比照,以排解可能的假阳性〕。

用TEbuffer溶解寡核苷酸至终浓度100?mol/L。

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