细胞冷冻保存技术课件.ppt

;细胞的低温保存;一般在原代或传代2－10次内即大量冻存，作为原种（stockcells），取一支细胞进行传代繁殖，用毕再冻存，这样可保证长期使用和延缓衰老。;;非玻璃化冷冻;

如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶，从而减少细胞内冰晶对细胞的损伤；相反，结晶很大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。;在细胞冻存时加入冷冻保护剂，可以保护细胞免受冷冻损伤。

原理：1.常用的低温保护剂是DMSO，它是一种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，降低细胞的冰点

2.提高胞膜对水的通透性，促进细胞内水渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少冰晶对细胞的损伤；解冻时，促进细胞外水进入细胞内，缓解渗透性肿胀。

3.稀释细胞内外未结冰溶液中的电解质，减少溶质损伤。;在培养液中添加的保护剂：;冻存和复苏的原则：慢冻快融;冻存培养细胞;;;慢冻程序;缓慢冷冻的简化程序;;;解冻程序;玻璃化冷冻;;玻璃化冷冻的程序;;;解冻程序;;;;;步骤