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微生物学试验指导书

微生物学试验指导书

试验一微生物的分别和纯化

本试验以微生物的分别和纯化为主线，综合包括了培育基的配制、消毒灭菌、微生物的分别等内容,在给定的时间内由学生自主完成。包括以下学问内容。学生书写试验报告的时候,不能照抄袭原文，要用自己的语言，表述试验过程，在别人看完你的试验报告后,能够知道你是怎样做的，能够重复你的试验过程。

一、目的要求1．了解培育基的配制原理，把握常用培育基的配制方法.

2．把握高压蒸汽灭菌的原理和操作方法。

学习、把握细菌、放线菌、酵母菌和霉菌稀释分别、划线分别等技术.

学习从样品中分别、纯化出所需菌株。

学习并把握平板倾注法和斜面接种技术,了解培育细菌、放线菌及霉等种类的微生物的培育条件.

二、原理

培育基是将微生物生长生殖所需要各种养分物质，用人工方法配制而成的各种养分基质。其中除含有水分、碳水化合物、含氮化合物和无机盐类。此外，微生物还必需在最适宜的酸碱度范围的培育基上生长生殖，因此，对不同种类的微生物，应将培育基调整到确定的PH值范围.依据争论目的不同,可将培育基制成固体、半固体和液体三种形式。固体培育基是在液体培育基中参与1.5～2％的琼脂作凝固剂，半固体培育基则参与0.5～0.8％的琼脂.有时为了特别目的，也可用明胶或硅胶等作为凝固剂。

由于微生物养分类型不同，应供给不同种类的培育基。在分别、培育异样微生物时，对一般细菌常用肉膏蛋白胨培育基，对放线菌常用高氏合成1号培育基，培育酵母菌、霉菌则用麦芽汁或豆芽汁葡萄糖培育基，有时也常用马丁培育基分别霉菌。马丁培育基除含有霉菌所含需的各种养分物外,还有孟加拉红染料，能抑制放线菌和细菌，链霉素可杀死或抑制细菌，但对霉菌均无害，所以这种培育基具有选择作用。

灭菌的方法很多，最常用的是加压蒸汽灭菌法。此法是把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进展的。在每平方厘米为一个大气压〔即15磅/时2〕的压力下，温度可达121℃，一般只要持续15～20分钟后，就可杀死一切微生物的养分体和它们的各种孢子.

由于加压蒸汽灭菌是通过提高蒸汽压力而使其上升温度以杀死微生物的，所以，该法只有当灭菌锅内的空气完全排尽后，才能到达最正确效果。

土壤是微生物生活的大本营,是查找和觉察有重要应用潜力的微生物的主要菌源。不同土样中各类微生物数量不同，一般土壤中细菌数量最多；其次为放线菌和霉菌。一般在较枯燥、偏碱性、有机质丰富的土壤中放线菌数量较多；酵母菌在一般土壤中的数量较少，而在水果表皮、葡萄园、果园土中数量多些.本次试验从土壤中分别细菌、放线菌和霉菌；自面肥或酒曲或果园土分别酵母菌.

为了分别和确保获得某种微生物的单菌落，首先要考虑制备不同稀释度的菌悬液。各类菌的稀释度因菌源、采集样品时的季节、气温等条件而异。其次，应考虑各类微生物的不同特性,避免菌源中各类微生物的相互干扰。细菌或放线菌皆喜中性或微碱性环境，但细菌比放线菌生长快，分别放线菌时,一般在制备土壤稀释液时添加10%的酚或在分别培育基中加相应的抗生素以抑制细菌和霉菌(如加链霉素25～50u/ml以抑制细菌；添加制霉菌素50u/ml或多菌灵30u/ml以抑制霉菌〕。酵母菌和霉菌都喜酸性环境，一般酵母菌只能以糖为碳源，不能直接利用淀粉，酵母菌在pH5时生长极快，而细菌生长适宜的酸碱度为pH7，所以分别酵母菌时只要选择好适宜的培育基和pH，可降低细菌增殖率，霉菌生长慢，也不干扰酵母菌分别。假设分别霉菌，需降低细菌增殖率，一般培育基临用前需添加灭过菌的乳酸或链霉素。为了防止菌丝集中干扰菌落计数，分别霉菌时常在培育基中参与化学抑制剂。

三、试验材料

1．药品:牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、硝酸钾、磷酸氢二钾、硫酸镁、硫酸亚铁、麦芽汁、氢氧化钠2．其它：试管、三角瓶、移液管、烧杯、量筒、玻棒、漏斗、纱布、棉花、牛皮纸、天平、PH

试纸、马铃薯干、高压蒸汽灭菌锅。

3无菌培育皿、无菌移液管、无菌玻璃涂棒〔刮刀〕、称量纸、药勺、橡皮头、10％酚溶液。四、试验方法与步骤：

(一)玻璃器皿的预备培育基的配制消毒灭菌

依据试验需要，预备各种玻璃器皿,洗刷干净，用报纸包扎好，进展干热灭菌。需要什么，需要多少，各试验组要认真核算，否则影响试验进程。

培育基的配制：

〔1〕称药品：依据配方，计算出试验中各种药品所需要的量，然后分别称取。

(2〕溶解:一般状况下，几种药品可一起倒入烧杯内，先参与少于所需要的总体积的水进展加热溶解(但在配置化学成分较多的培育