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GB4789.3-2016大肠菌群平板计数法方法学验证报告
一、验证目的
验证GB4789.3-2016《食品微生物学检验大肠菌群计数（大肠菌群平板计数
法）》在本实验室的适用性。
二、验证方法
本实验样品取不同不同类型产品进行实验，严格按照GB4789.3-2016进行，
本实验方法设计如下：
样品种类样品名称样品编号实验人员实验方法
包装饮用水xxxxxxc、b双人双平行
乳粉xxxxxxc、a双人双平行
豆制品xxxxxxa、b双人双平行
除上述实验程序外，为保证本次验证的科学性和准确性，本次实验添加阳性对
照组，对照组由标准菌株大肠埃希氏菌（CICC10389）接种培养而成，与样品实验
程序同时进行。
三、验证设备和试剂
1.冰箱：BCD-212DG/A海信（北京）电器
2.生化培养箱：LRH-70上海一恒科学仪器
3.电位pH计：PHS-3C+（精确度0.01）成都世纪方舟科技有限公司
4.无菌均质器：SCIENTZ-04宁波新芝生物科技有限公司
5.恒温振荡器：SHA-A江苏金坛环宇科学仪器厂
6.菌落计数仪：Scan-500北京五洲东方科技发展有限公司
7.天平:JE-502上海浦春计量仪器有限公司
8.超净工作台:SW-CJ-2FD上海博迅实业
9.显微镜：B203LED重庆奥特光学仪器有限公司
培养基和试剂：
1.结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）北京陆桥技术股份有限公司
2.煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤北京陆桥技术股份有限公司
3.无菌生理盐水：同GB4789.3项下制法。
四、验证环境
1
1.依据《消毒与灭菌效果的评价方法与标准GB15981-1995》定期对高压蒸汽灭菌
锅的灭菌效果进行检测评价并记录；
2.依据《无菌室消毒灭菌操作规程》定期对对无菌室、超净台进行清洁消毒灭菌
并记录；
3.依据《实验室质量控制规范食品微生物检测GB/T27405-2008》定期对对无菌室
及超净台进行沉降菌检测并记录；
4.无菌室检验：详见《xxxx》；
五、验证步骤
1.样品的稀释
1.1固体和半固体样品：称取25g样品放入盛有225mL生理盐水的无菌均
质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。
1.2液体样品：以移液枪吸取25mL样品置盛有225mL生理盐水的无菌锥形
瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
1.3样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1mol/LNaOH或1
mol/LHCl调节。
1.4用1mL微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入9mL生
理盐水的无菌试管中，振摇试管使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。
1.5根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样
品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸头。从制备样品匀液至
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