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牦牛弓形虫病诊断技术

1范围

本文件规定了牦牛弓形虫病的临床诊断、病原检查、PCR检测和抗体检测（ELISA）的技术要求。

本文件适用于牦牛弓形虫病的诊断、流行病学调查及检疫。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

NY/T573-2022动物弓形虫病诊断技术

GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法

GB19489-2008实验室生物安全通用要求

NY/T541-2016兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1弓形虫Toxoplasmagondii

是球虫纲、真球虫目、肉孢子虫科、弓形虫属的原虫。动物急性感染弓形虫后，主要表现为发热、

腹泻、呼吸困难和中枢神经系统症状等，剖检以肺间质、淋巴结水肿为主要病变特征。

3.2牦牛弓形虫病yaktoxoplasmosis

由牦牛摄入弓形虫感染性卵囊引起的以发热、腹泻、呼吸困难及流产和中枢神经系统症状为特征的

急性或慢性原虫病。

4缩略语

BSA：牛血清白蛋白（BovineSerumAlbumin）

TMB：3,3,5,5-四甲基联苯胺（3,3,5,5-Tetramethylbenzidine）

PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

ELISA：酶联免疫吸附试验（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay）

PBS：磷酸盐缓冲液（Phosphate-BufferedSaline）

5临床诊断

5.1临床特征

1

患病牦牛出现神经症状、发热、呼吸困难、极度虚弱；患病妊娠母牛出现早产、流产；患病犊牦牛

出现呼吸困难、咳嗽、打喷嚏、鼻有分泌物、口有泡沫、发热、神经症状、高度沉郁、脱水，偶有腹泻，

部分2d~6d内死亡。

5.2初步判定

根据临床症状如流产、神经症状、发热、呼吸困难、精神沉郁等特征可做出初步判定。当发现可疑

牦牛时，需继续观察或采取病料送实验室进一步检查。

6样品的采集、保存和运输

6.1样品的采集

无菌采集疑似患病动物（或死亡动物）的淋巴结穿刺液、血液、腹水或羊水等体液0.5mL~1mL或

脑、胎盘、心、肺、骨骼肌等组织2g~5g。为防止可能的布鲁氏菌病混合感染，采样过程须穿好工作服、

佩戴好口罩、胶鞋、手套等防护用品。

6.2样品的保存

样品采集后置于样品保存袋中，封口后，每份样品的包装袋上均要贴上标签，写明采集地点、采集

时间、采集部位、牦牛种类、年龄等详细资料，置于2°C~8°C冰箱内保存。

6.3样品的运输

将采集样品在24h内送往实验室进行检测，采样应符合NY/T541-2016。

7病原检查

7.1材料与试剂

7.1.1器材

离心机、离心管、光学显微镜、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、试管、微量移液器和吸头。

7.1.2试剂

姬姆萨染液（见附录B.1）、PBS（见附录B.2）、甲醇。

7.2操作方法

淋巴结穿刺液、腹水或羊水等体液经350g（1500r/min）离心10min，取沉淀涂片，干燥、固定和

姬姆萨染色，光镜下观察；脑、胎盘、心、肺、骨骼肌等组织涂片或触片经姬姆萨染色，光镜下观察。

7.3结果判定

淋巴结穿刺液、血液、腹水、羊水等体液在光镜下检测到弓形虫速殖子则判定为病原学阳性；组织

涂片或触片，光镜下检测到弓形虫速殖子（见附录A.1）或包囊和缓殖子（见附录A.2）则判定为病原学

阳性。

8PCR检测

2

8.1设备和器材

8.1.1器材

PCR仪、离心机、组织破碎仪、核酸电泳仪、核酸电泳槽、凝胶成像分析仪、微量移液器及吸头、

PCR管等。

8.1.2试剂

全血/组织/细胞基因组DNA提取试剂盒、2×TaqMasterMix、DL2000DNAMar