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微专题18PCR及其应用
1.PCR与病毒检测
新冠病毒感染的常规检测方法是通过实时荧光PCR鉴定。实时荧光PCR扩增目的基因,需额外添加荧光标记探针(一小段单链DNA,可与目的基因中部分序列特异性结合)。当探针完整时,不产生荧光。在PCR过程中,与目的基因结合的探针被TaqDNA聚合酶水解,R与Q分离后,R发出的荧光可被检测到(如图甲所示)。通过实时荧光PCR检测新冠病毒感染时,检测到的荧光强度变化如图乙所示。
2.基因定点突变与基因改造
重叠延伸PCR是一项重要的基因定点突变技术,其主要设计思路是用具有互补配对片段的引物(如图中的引物2和引物3,突起处代表与模板链不能互补的突变位点)
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