14.水稻核辐射靶向基因突变筛选技术规程.docx

Q/LB.□XXXXX-XXXX

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ICS

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CCS

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FORMTEXT43

FORMTEXT湖南省地方标准

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FORMTEXT?????

FORMTEXT水稻核辐射靶向基因突变筛选技术规程

FORMTEXTCodefortargetedgenescreeningtechniquesonricemutantbynuclear-radiation

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FORMDROPDOWN

FORMTEXT（本草案完成时间：2023.12.21）

FORMDROPDOWN

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX发布

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX实施

FORMTEXT湖南省市场监督管理局??发布

STYLEREF标准文件_文件编号DB43XXXXX—XXXX

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STYLEREF标准文件_文件编号DB43XXXXX—XXXX

目次

TOC\o1-1\h\t标准文件_一级条标题,2,标准文件_附录一级条标题,2,前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4原理 1

5核辐射诱变源及材料 2

5.1诱变源 2

5.2主要材料 2

6仪器设备及试剂盒 2

6.1仪器设备 2

6.2试剂盒 2

7操作步骤 3

7.1诱变材料的选择 3

7.2水稻核辐射最佳诱变剂量 3

7.3辐射诱变材料群体的种植 3

7.3.1M1代植株种植 3

7.3.2M2代植株种植与取样 3

7.3.3目标基因分子探针设计 3

7.3.4DNA提取 3

7.3.5基因组DNA文库构建 3

7.3.6探针和文库的杂交 3

7.3.7目标基因片段产物富集 3

7.3.8目标基因片段扩增 3

7.3.9扩增产物的测序和生物学分析 3

7.3.10变异位点的检测 3

8植株材料编号 3

9突变体档案 3

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件的某些内容可能涉及到专利，本标准的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由湖南省农业农村厅提出。

本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。

本文件起草单位：湖南省核农学与航天育种研究所。

本文件主要起草人：杨震、张莉、张逸妍、吕思维、张渊海、李文革、张勇、彭妙、彭选明。

本文件为首次制定。

水稻核辐射靶向基因突变筛选技术规程

范围

本文件规定了水稻核辐射靶向基因突变筛选技术的原理、诱变源及材料、仪器设备以及操作步骤等内容。

本文件适用于采用核辐射诱变水稻种子获得目标基因突变体。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T4404.1粮食作物种子第1部分：禾谷类

GB/T5084农田灌溉水质标准

GB/T17891优质稻谷

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

植物辐射plantirradiation

指利用物理诱变源照射的方法对植物种子、子房、花粉、营养器官以及愈伤组织进行处理的方法。

最适宜辐射剂量optimalradiationdosage

水稻辐射后的M1代植株在两叶一心期植株苗高降低对对照的一半时的辐照剂量为最适宜剂量。

靶向筛选targetedscreening

确定目标基因，用目标基因的序列设计探针，与基因组杂交捕获，对捕获片段PCR扩增，测序获得目标基因的突变位点信息。

4原理

采用物理诱变源对水稻干种子进行辐射诱变后，在M2代植株的苗期提取基因组DNA，构建DNA文库；根据野生型水稻目标基因设计分子探针；将探针与DNA文库进行杂交；采用磁珠对杂交后的产物进行富集，构建富集文库；对富集文库进行鉴定分析，筛选出与野生型水稻基因的序列有差异的目标基因，得到目标基因突变体