【同步学案】3.1重组DNA技术的基本工具(课件版共49张PPT).ppt.pptx

3.1重组DNA技术的基本工具;;;一、基因工程的诞生和发展

1.基因工程的概念

按照人们的愿望,通过转基因等技术,赋予生物新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。从技术操作层面看,由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的,因此又叫作重组DNA技术。?;2.基因工程的问世

1973年,科学家证明质粒可以作为基因工程的载体,构建重组DNA,导入受体细胞,使外源基因在原核细胞中成功表达,并实现物种间的基因交流。至此,基因工程正式问世。;3.基因工程的发展(连线);微思考1为什么不同生物的DNA可以进行体外重组?

提示:不同生物中DNA分子的基本组成单位相同,都是4种脱氧核苷酸;空间结构相同,都是规则的双螺旋结构;生物界共用一套遗传密码,相同的遗传信息在不同生物体内表达出相同的蛋白质。;二、重组DNA技术的基本工具

1.限制性内切核酸酶——“分子手术刀”

(1)来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的。?

(2)作用:识别双链DNA分子的特定核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。?

(3)识别序列的特点:大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成,少数由4个、8个或其他数量的核苷酸组成。;(4)结果:产生DNA片段末端(通常有黏性末端和平末端两种形式)。?;2.DNA连接酶——“分子缝合针”

(1)作用:将切下来的双链DNA片段“缝合”起来,恢复被限制酶切开的磷酸二酯键。?

(2)结果:拼接成新的DNA分子。?;(3)种类:

①E.coliDNA连接酶:从大肠杆菌中分离得到,只能连接具有互补黏性末端的DNA片段。?

②T4DNA连接酶:从T4噬菌体中分离出来,既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端,又可以“缝合”双链DNA片段的平末端,但连接平末端的效率相对较低。?;3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”

(1)作用:将外源基因送入受体细胞。?

(2)常用载体——质粒。

①本质:一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外,并具有自我复制能力的环状双链DNA分子。?;②作为载体的条件:a.有一个至多个限制酶切割位点,供外源DNA片段(基因)插入其中;b.进入受体细胞后,能在细胞中进行自我复制,或整合到受体DNA上,随受体DNA

同步复制;c.常有特殊的标记基因,便于重组DNA分子的筛选。?

(3)其他载体:噬菌体、动植物病毒等。

微点拨相同的黏性末端不一定来自同一种限制酶的切割,可能来自不同限制酶的切割。;微思考2

1.DNA连接酶和DNA聚合酶的作用部位相同吗?

提示:相同。两种酶的作用部位都是磷酸二酯键,只是DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键,而DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸加到已有的DNA片段上,且需要以一条DNA链为模板。

2.基因工程中需要哪几种工具,哪几种工具酶?

提示:基因工程中需要三种工具,即限制酶、DNA连接酶和载体。但工具酶只有两种,即限制酶和DNA连接酶。;微判断

1.限制酶和DNA解旋酶的作用部位相同。()

2.DNA连接酶能将两个碱基通过氢键连接起来。()

微训练基因工程中用来修饰、改造生物基因的工具是()

A.限制酶和水解酶

B.限制酶和DNA连接酶

C.限制酶和载体

D.DNA连接酶和载体

答案:B;三、DNA的粗提取与鉴定

1.提取原理

(1)DNA不溶于酒精,但某些蛋白质溶于酒精。?

(2)DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,它能溶于物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液。?

2.鉴定原理

在一定温度下,DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。?;一 限制酶和DNA连接酶

重难归纳

1.限制酶的切割位点;(1)切割位点:磷酸二酯键。

(2)限制酶切割的只能是箭头①所指的键,因为磷酸二酯键中的另一个化学键属于一个核苷酸内部的化学键。

(3)图中②是氢键,是解旋酶的作用部位。;特别提醒(1)限制酶在微生物中能将外来的DNA分子切断,能够限制异源DNA分子的入侵并使之失去活力,但不切割自身DNA分子,对自身DNA分子无损害作用,这样可以保护细胞自身的遗传信息。原因是原核生物的DNA分子中不存在该限制酶的识别序列或识别序列已经被修饰。

(2)限制酶是一类酶而不是一种酶。限制酶的化学本质为蛋白质,其作用的发挥需要适宜的理化条件,高温、强酸或强碱均易使之变性失活。;2.限制酶切割位点与DNA片段的关系

(1)链状DNA分子上如果有1个酶切位点,用限制酶切割后形成2个DNA片段;如果有2个酶切位点,用限制酶切割后形成3个DNA片段。以此类推。

(2)环状