光学分析法—紫外可见分光光度仪（仪器分析课件）.pptx

基本原理;紫外一可见分光光度法是利用物质在紫外、可见光区的分子吸收光谱，对物质进行定性分析、定量分析及结构分析的方法。按所吸收光的波长区域不同，分为紫外分光光度法(200-400nm)和可见分光光度法(400-750nm)，合称为紫外一可见分光光度法。;如有一生物试样含铁量为0.01mg?g-1。试样经处理后，用1.8?10-3mol?L-1的KMnO4溶液滴定，到达化学计量点时，所用KMnO4溶液的体积为0.02ml。而通常滴定管的读数误差就有0.02ml，显然用滴定法测定该试样中的含铁量是不合适的。但是，在适当的反应条件下加入一种试剂（如磺基水杨酸），使它与Fe3+生成紫红色螯合物，即可用吸光光度法测定其含量。;;紫外?可见吸光光度法的特点;基本原理;1.光的波动性

光的干涉、衍射等现象无可争辩的表明光具有波动性，光既是波（是电磁波的一种），又是粒子，只有这样才能解释所有的光学现象。;1.光的粒子性;2、单色光、复色光和互补色光;基本原理;物质对光的选择性吸收的本质，可通过吸收光谱产生的原因来说明。物质都处于运动状态，分子内部的运动有三种，除价电子绕着分子轨道高速旋转外（电子运动），还有原子在平衡位置附近的振动（分子振动）和分子绕着其重心的转动（分子转动）。因此，一个分子的能量也包括三部分，即分子的电子能级的能量、分子振动能级的能量及整个分子转动能级的能量。;分子中价电子能级间的能量差一般在1?20ev，这恰好是可见光和紫外光的能量。可见光常用于有色物质含量的测定。紫外光用于具有紫外吸收基团的无色物质含量的测定。振动能级间的能量差一般在0.05?1ev，相当于红外光的能量。而转动能级间的能量差一般在10-4?0.05ev，相当于远红外光及微波的能量。红外光谱常用于研究有机物的结构。;分子内部各种能级能量的改变都是量子化的，因此当分子吸收能量之后受到激发，分子就从基态能级跃迁到激发态，即M（基态）+h??M*（激发态），而产生吸收谱线，因此紫外-可见吸收光谱是由于分子中价电子的跃迁而产生的。物质对光的吸收是物质的分子、原子或离子与辐射能相互作用的一种形式，只有当入射光子的能量与吸光体的基态???激发态的能量差相等时才会被吸收。由于吸光物质的性质不同，所以物质对光的吸收是有选择性的，不同物质的分子从基态跃迁到激发态所需的能量各有差异。故它只能选择性地吸收与之相当，即??=E2-E1=h?。;例题：某分子中两个电子的能级差为1eV，若要电子在两个能级之间发生跃迁，需要吸收的光的波长是多少纳米？如果能级差为20eV，波长应多大？;2.物质颜色的产生;以上仅简单地用有色溶液对各种波长光的选择吸收来说明溶液的颜色。究竟某种溶液最易选择吸收什么波长的光？;基本原理;以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图可得一曲线，如图课本上的高锰酸钾溶液的吸收图所示，称为光吸收曲线。;对不同物质的溶液，其最大吸收波长不同，此特性可作为物质定性分析的依据。对同一物质，溶液浓度不同，最大吸收波长相同，而吸光度值不同。因此，吸收曲线是吸光光度法中选择测定波长的重要依据。;吸收曲线的讨论：;吸收曲线的讨论：;基本原理;四、光的吸收定律?朗伯-比耳定律;1.光强度、透射率和吸光度;1729年波格（Bouguer）发现了物质对光的吸收与吸光物质的厚度有关。1760年朗伯提出了一束单色光通过吸光物质后，光的吸收程度与溶液液层厚度正比的关系，该关系称为朗伯定律。即;1852年比耳又提出了一束单色光通过吸光物质后,光的吸收程度与吸光物质微粒的数目(溶液的浓度)成正比的关系，该关系称比耳定律。即;将两个定律合并起来就成为朗伯-比耳定律，其数学表达式为：;吸光系数;ε是各种吸光物质在特定波长和溶剂下的一个特征常数，数值上等于在1cm的溶液厚度中吸光物质为1mol?L-1时的吸光度，它是吸光物质的吸光能力的量度。值是定性鉴定的重要参数之一，也可用以估量定量分析方法的灵敏度，即ε是各种吸光物质在特定波长和溶剂下的一个特征常数。;ε值越大，表示该吸光物质对某一波长的吸光能力越强，则方法的灵敏度越高。为了提高定量分析的灵敏度就必须选择合适的试剂与被测物生成ε值大的配合物及具有最大ε是各种吸光物质在特定波长和溶剂下的一个特征常数，它是吸光物质的吸光能力的量度。值的波长的单色光作为入射光。通常由于实验结果计算ε值时，是以被测物质的总浓度代替吸光物质的浓度，这样计算的ε值实际上是表观摩尔吸光系数。ε和a的关系为ε=aM。M为物质的摩尔质量。;一是必须使用单色光；

二是吸收发生在均匀的介质；

三是吸收过称中，吸收物质不发生作用。;吸光光度法中，光的吸收定律是定量测定物质??量的基础。根据A=εbc这一关系式，以A对c作图，应为一通过原点的直线，通常