SD 大鼠脓毒血症.pdf

大鼠脓毒血症建立方法

SD大鼠,体重190～270g,雌雄均有,禁食24h后进行实验。用2.5%戊巴比妥

钠按1ml/kg体重,腹腔注射麻醉大鼠,随机分为实验组和对照组(假手术组)。

常规消毒腹部,在下腹部正中央切口,长约2cm,打开腹腔寻找盲肠,小心分离

其远端与大肠的系膜,盲肠内如有粪便,则把粪便小心挤向相连的大肠,实验组

在盲肠远端1/2处用无菌4号丝线紧紧结扎,并用无菌7号针头在已结扎盲肠

远段中央处贯通穿刺。然后把盲肠推回腹腔,关闭腹腔,逐层缝合。对照组仅做

开腹分离盲肠远端与大肠的系膜及关腹手术。术后按50ml/kg体重皮下注射生

理盐水,补充手术中丢失的体液,连续观察24h,整个实验过程中在室温22～

25℃环境进行并让大鼠自由饮水。在盲肠结扎前、结扎后8h、16h、和24h在

无菌条件下取大鼠尾血1滴进行细胞培养,实验组还在无菌条件下取腹腔渗出

液少许进行细菌培养。

用结扎整个盲肠加穿刺的方法可复制出动物的理想败血症模型,因为动物模

型血液细菌培养阳性,培养出来的细菌与感染灶细菌完全或部分相同,动物表现

与临床败血症类似,重复性好,模型复制后有一定的存活时间供研究之用。有人

把结扎整个盲肠改为结扎盲肠1/2,把穿刺盲肠2次改为贯通穿刺盲肠,操作更

为简便,效果也令人满意。

造成盲肠缺血坏死,自身肠道的细菌进入腹腔造成感染。血液培养显示,在

CLP后16h,血液已有大肠杆菌及绿脓杆菌生成,与腹腔渗出液细菌培养结果

相同;培养出的菌种与报道略有不同,这可能是由于大鼠来源及实验室的条件不

同造成的。

实验组动物术后24h活杀,见盲肠结扎的远端已发生坏死,穿刺的针孔明显,

腹腔感染,有臭味的渗出液,但腹腔未见粪便,这与人类阑尾穿刺并发腹膜炎等

疾病过程相似。大鼠盲肠结扎加穿刺引起的败血症存活情况与结扎盲肠部分的多

少,穿刺针孔的多少和大小有关。针孔多,针孔大,死亡率高。上述结扎整个盲

肠并用9号针头刺孔2个,24h有75%大鼠死亡。有人结扎1/2盲肠并用7号

贯通穿刺,24h无大鼠死亡。另外,饲养动物环境也是影响动物存活率的重要因

素。有人曾在室温30℃时,饲养CLP大鼠5只,结果在24h内全部死亡。

大鼠脓毒症预后判断指标集及预测模型的初步研究

脓毒症是感染导致的全身炎症反应综合征(SIRS),是各种严重创伤、烧伤、休克、

再灌注损伤及外科大手术后常见的并发症,其死亡率高达30-50%。脓毒症的发生

机制极其复杂,其复杂性和非线性的特点导致了对其诊断、预测和治疗的不确定

性。这也是当前脓毒症死亡率居高不下的主要原因。因此,研究脓毒症生物标志

物,探讨脓毒症诊断、预测、疗效评估的新方法,以指导脓毒症的防治,降低其发病

率和死亡率,具有重要的科学意义。本课题采用盲肠结扎穿刺(CLP)制备大鼠脓毒

症模型,观察大鼠CLP前后血清炎症介质TNF-α,IL-1β,IL-6,粒细胞-巨噬细胞集

落刺激因子(GM-CSF),高迁移率族蛋白1(HMGB1)和单核细胞趋化蛋白

-1(MCP-1)及血尿素氮(BUN),肌酐(Cr),乳酸脱氢酶(LDH),谷丙转氨酶(ALT),谷草

转氨酶(AST),肌酸激酶(CK)和血常规的变化,探讨上述指标的改变及其与脓毒症

大鼠预后的关系,试图筛选出有意义的指标建立指标集,并采用该指标集对脓毒症

大鼠进行预后评估,以改善脓毒症大鼠预后评估的敏感性、特异性和准确度。结

果如下：1.大鼠CLP模型复制：大鼠行CLP后,6h开始死亡,12-24h死亡最多,72

小时死亡率为59%；血清炎症介质TNF-α,IL-1β,IL-6,GM-CSF及HMGB1水

平显著升高；CLP术后12h处死大鼠,发现多个器官(心、肝、肺、脑及肾)发生

组织形态学改变。2.根据CL