外周血循环肿瘤细胞检测技术进展.pptx

外周血循环肿瘤细胞检测技术;主要内容;循环肿瘤细胞

（circulatingtumorcells,CTCs）;研究CTCs的临床意义;TNM分期的重要补充;疗效监测和预后判断;个体化治疗的指导;转移复发的早期预警;血循环转移的机制;CTCs特点;CTC的

检测步骤;以特异性抗体经抗原抗体吸附筛选;免疫磁性分离;光镜下(放大倍数400倍)免疫磁珠吸附目标细胞;分子生物学方法(PCR);CellSearchTM（免疫磁珠技术）

采用与细微铁颗粒结合的抗体(铁液)。铁液特异性结合循肿瘤细胞，其强大的磁场把循环肿瘤细胞“牵引”出血样，再用染色鉴定。;CellSearch检测CTCs流程图;1、不同肿瘤表面抗体的表达量存在差异;磁珠体积很小，不损伤细胞、不影响细胞功能、不影响细胞的特异染色(细胞膜，细胞质，细胞核)，显微镜下可直接观察或计算机计数。

前期应用微米磁珠，比表面积小、尺寸大、稳定性差、易聚沉，致细胞分离效率低，难洗脱并保持细胞活性；

检测成本高、样品用量多、样品检测时间长、检测过程封闭等诸多不足．

纳米技术增大比表面积，分散性好，降低机械压力，提高富集率;纳米技术;基于非磁性纳米材料的CTC富集;基于非磁性纳米材料的CTC富集;HouS,etal.AdvMater,2013,25(11):1547-1551;微流控技术;2007年Toner在Nature报道他们开发的一套微流芯片系统----CTCschip

核心是在单晶硅表面蚀刻形成的微柱阵列，表面经上皮细胞吸附分子（Anti-EpCAM）抗体进行修饰，对循环肿瘤细胞的选择性吸附和捕获

被捕获的细胞分布在微流芯片三维空间内;CTC-chips;纳米技术与微流控技术结合;磁性纳米材料与微流控结合;非磁性纳米材料与微流控结合;A)TheHB-Chipconsistsofamicrofluidicarrayofchannelswithasingleinletandexit.Insetillustratestheuniformbloodflowthroughthedevice.(B)Amicrographofthegroovedsurfaceillustratestheasymmetryandperiodicityoftheherringbonegrooves.Cartoonillustratingthecell-surfaceinteractionsin(C)theHB-Chip,and(D)atraditionalflat-walledmicrofluidicdevice.Flowvisualizationstudiesusingtwopairedstreamsofthesameviscosity(onestreamisgreen,theotherclear)demonstrate(E)thechaoticmicrovorticesgeneratedbytheherringbonegrooves,andthelackofmixingin(F)traditionalflat-walleddevices.;TonerM,etal.ProcNatlAcadSciUSA.2010，107(43):18392-7

BloodfrommetastaticprostatecancerpatientsandhealthydonorswasprocessedusingtheHB-Chip.(A)Healthydonors(n=10,redcircles)wereusedtoselectthesignalintensitythresholdinourautomatedimagingsystem(19).Themetastaticprostatecancerpatientdata(n=15,greencircles)hadsignificantlyhigherresults,with1415patientsamplespresentingCTCsabove-thresholdlevels.

Additionally,(B)theTMPRSS2-ERGfusiontranscriptwasdetectedfromRNAisolatedfromtheHB-Chip,usingRT-PCR.Sequencing