高效液相色谱原理第一讲.ppt

阳离子交换分离机理ＳＯ４２－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ＳＯ４２－ＣＯ３２－ＳＯ４２－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－Ｃｌ－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋Ｃｌ－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ＣＯ３２－ＳＯ４２－ＨＣＯ３－Ｃｌ－ＳＯ４２－Ｃｌ－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－TemporalcourseＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ＨＣＯ３－ＳＯ４２－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－Ｃｌ－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋第31页,共56页，星期六，2024年，5月ＳＯ３－ＳＯ３－ＳＯ３－ＳＯ３－Ｎ＋Ｒ３Ｎ＋Ｒ３Ｎ＋Ｒ３Ｎ＋Ｒ３Ｎ＋Ｒ３Ｎ＋Ｒ３Ｎ＋Ｒ３Ｎ＋Ｒ３Ｎ＋Ｒ３Ｎ＋Ｒ３Ｎ＋Ｒ３Ｎ＋Ｒ３阴离子交换分离机理５μm＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋第32页,共56页，星期六，2024年，5月(四)体积排阻色谱固定相：具有一定大小孔隙的凝胶；原理：借助多孔性凝胶孔径的大小，使样品中的大分子不能进入凝胶孔洞而完全被排阻，只能沿凝胶粒子之间的空隙通过色谱柱，而首先被洗脱出来。被分析样品可按分子的相对大小分别先后流出。第33页,共56页，星期六，2024年，5月(五)亲和色谱原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性亲和力，进行选择性分离。先在载体表面键合上一种具有一般反应性能的间隔臂(环氧、联胺等)，再连接上配基(酶、抗原等)，这种固载化的配基将只能和具有亲和力特性吸附的生物大分子作用而被保留.改变淋洗液后洗脱。第34页,共56页，星期六，2024年，5月按分离过程物理化学原理分类的各种液相色谱法的比较具有锁匙结构络合物的可逆性离解多孔凝胶的渗透或过滤可逆性的离子交换吸附与解吸分离原理不同pH值的缓冲溶液，加入改性剂有机溶剂或一定pH值的缓冲溶液不同pH值的缓冲溶液不同极性有机溶剂流动相多种不同性能的配位体键联在固相基体上具有不同孔径的多孔性凝胶高效微粒离子交换剂溶解与挥发不同极性有机溶剂和水固定液载在固相基体上全多孔固体吸附剂固定相亲和色谱体积排阻色谱离子色谱分配色谱吸附色谱相\色谱第35页,共56页，星期六，2024年，5月四、HPLC特点、流程及主要部件特点流程主要部件第36页,共56页，星期六，2024年，5月HPLC仪器（1）第37页,共56页，星期六，2024年，5月液相色谱仪（2）第38页,共56页，星期六，2024年，5月液相色谱仪（3）第39页,共56页，星期六，2024年，5月液相色谱仪（4）第40页,共56页，星期六，2024年，5月1.HPLC的特点分离效能高选择性能高检测灵敏度高分析速度快第41页,共56页，星期六，2024年，5月2.流程第42页,共56页，星期六，2024年，5月色谱的基本流程图淋洗液高压泵分离柱检测器泵液分离检测记录进样器抑制器检测器进样第43页,共56页，星期六，2024年，5月3.主要部件输液泵(高压)梯度淋洗器(装置)进样器(装置)分离器(柱)检测器(装置)结果记录器(计算机及软件)第44页,共56页，星期六，2024年，5月(1)高压输液泵主要部件之一，压力：150～350×105Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10