植物组织培养学习心得.pdf

一、外围准备

1.碟子和所有器械清洗完毕后要将水擦干，用报纸捆包好，再放灭菌锅内灭菌。

需灭菌的器械有：镊子、剪刀、刀片，碟子（8个包一包），玻璃杯2个和纱布（纱布用手

撕成小块，不能用剪刀剪，否则用于擦试工作台等容易留下剪刀口布屑）。

2.培养基可不经过煮制，将所有物质称量好，琼脂粉等需要溶解的物质溶解，之后混合定容

调PH值，再倒入灌装机分装，分装时需不停的搅拌培养基，灌装时勿将培养基滴洒在瓶口，

否则需用抹布擦干净或换玻璃瓶。

3.灭菌锅在消毒前先预热，将夹层压力上升，减少煮制时间，煮完后手动慢慢放气（使湿热

蒸汽趁热散去而不打湿防潮物）让压力下降，十多分钟让室内压力降至0（避免闷锅时间长

导致培养基不凝固），后取出后趁热迅速拧紧瓶盖，待冷却后移至缓冲室平放，使培养基平

铺在瓶底凝固。

4.外植体取材：取当年生萌动状态的饱满嫩枝作为外植体，先用5%洗衣粉浸泡5min，用刷

子轻轻刷，用流水冲洗1小时，蒸馏水冲洗3-5次，可去除较多粉尘和微生物，之后将外植

体移至酒精擦好的带盖瓶子，放入无菌操作台备用。

二、内围接瓶

1.将所有需要摆上无菌操作台的东西用酒精擦试表面后摆好，需用酒精擦试的物品（包括：

工作台面，台周围玻璃和母瓶，新培养基瓶，酒精灯，搁置架，打火机等），母瓶和新培养

基放左上方，酒精灯放左下方，身体正前方放碟子，右上方靠左放器械搁置架，右上方靠右

放接种器械灭菌器，左下方放打火机和半瓶酒精，后开紫外灯20min，再通风20min后开始

操作。

2.工作人员进入无菌接种室前，应先将手表、手镯、戒子等放室外，将手和手腕用肥皂清洗

干净后，用酒精纱布擦拭双手、双腕，之后换工作服，包括更换拖鞋，穿白大褂，接种人员

还要扎好头发，戴好帽子和口罩，指甲需剪短，将手和手臂用酒精擦试后戴手套操作，在组

培室内不得高声喧哗、打闹，接种时不得随意谈话、说笑，以免造成污染，台外人员走动要

轻，动作要小。

3.打开无菌操作台玻璃门之前先用酒精雾喷，使悬浮在无菌操作台周围的灰尘颗粒沉降，操

作时将搁置架在酒精火焰上方灼烧一下，正式接种前再用酒精擦一遍操作台上所有能擦的地

方，打开包装好的碟子（注意手一定不能接触碟子边沿），镊子，刀片从报纸取出后，先用

酒精擦试一下，再放在酒精灯火焰上灼烤一遍（工具的每一点在火焰上灼烤时间不得少于5

秒钟），之后开始接（转）苗。

4.外植体的消毒只用酒精和次氯酸钠（钙），升汞容易残留影响植株生长，也会导致重金属

污染。消毒时间的长短需要做大量实验，最优的消毒时间定为：既有污染的，也有消毒好没

被污染的，也有褐化的即为最佳消毒时间。

5.取苗：每个瓶子在打开之前瓶口都需在火焰上灼烧7-10秒，再开瓶盖，正式取苗时，瓶口

不要斜向外或直立向上而是斜向右，以免空气中微生物落入瓶中。转苗时一次取苗不可太多，

以免风干。

6.切苗：碟子放在离风窗10-20厘米处，不可太往外，镊子和手术刀都不可太热，最好是凉

的，在操作过程中，刀和镊子都要在碟子斜上方操作，不可在其正上方操作，更不能交叉过

碟子上方操作，切苗过程中产生的垃圾堆放在碟子一侧。注意操作操作人员的头、胳膊等不

得进入台内。

7.接苗：将未接瓶的培养基瓶口在酒精灯火焰上灼烤7-10秒，烤完瓶口后再接苗，接苗时，

镊子最好不要与瓶口接触，一瓶内一般接5-6棵苗，不要放太多，动作要迅速，组培苗在瓶

内要排放均匀整齐，美观。

8.封口、记录，接好后用酒精火焰灼烧瓶口封口，后迅速盖好瓶盖扭紧。碟子一瓶母瓶用一

个，用完之后用镊子挑起拿开，接好的瓶苗要马上随手放到无菌操作台外面推车上，工作过

程中所产生的垃圾要及时清理，防止污染后面接的。下台前要把品种代号、培养基类型、个

人编号以及接种日期标示到瓶上。

9.接好后将工作台擦试干净，把接种过程中产生的垃圾清理掉，台上的物品摆放整齐，用消

毒粉兑水拖接种室和培养室地面，后开紫外灯照射。工作人员进出组培室要随手关门。

10.培养室温度必须控制在25度左右，减少虫子进入，保证植物培养最适温度。

11.每接完一批放在台上的母瓶之后要用酒精将台面能擦的地方都擦一遍。

三、灭菌

1.对污染苗灭菌：一经发现就随即灭菌处理，大量的进行高压锅灭菌，少量的加入工业酒精

在室外进行处理。

2.室内空气灭菌：每四周用高猛酸钾和甲醛（或臭氧）对室内空气灭菌一次。

3.室内地面：每接种一次用消毒粉兑水拖一遍地面。

4.接种室在接种前4-5天必须通风换气，在接种前一天对接种室进行全面消毒。

四、移栽

将瓶苗从室内取出后先用遮阳网盖着，之后掀去遮阳网，之后扭松瓶盖，再取出