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磷酸肽的合成

1简介

由蛋白激酶介导的蛋白质磷酸化的主要机制是由外部生理学刺激调节的真核生物细胞

过程,而磷酸肽是研究这个过程的主要工具，磷酸酶作为模板底物，抗原磷酸化蛋白质、抗

体生产和参比化合物来共同决定它们的物理参数。过去几年里，合成磷酸肽的方法引起了大

家的强烈兴趣。这些方法目前已经成为了通用可靠的常规合成方法。

目前有两种策略用于制备磷酸肽:

1）单体法,预先合成保护的磷酸氨基酸，再在肽链上组装;

2）整体磷酸化法,它包括肽链合成完成后再在固相载体上磷酸化丝氨酸、苏氨酸、酪

氨酸的侧链羟基。

2单体法

2.1简介

单体法当然是方法越简单越好，因为现在可以选择用保护的磷酸氨基酸来合成,所以单

体法成为合成磷酸肽的常用方法。

Fmoc/tBu固相合成策略中，针对侧链保护的磷酸酪氨酸来说，甲基，苄基，叔丁基，

二烃基氨基，硅基都曾被运用过。在这些基团中，苄基最常用，非常方便导入，同时在TFA

酸解体系中容易去除。目前只有这个Fmoc-Tyr(PO(OBzl)-OH)-OH1单苄酯实现了商业化。二

苄酯不实用，因为在用哌啶脱Fmoc保护基时会脱一个苄基。

Fmoc-Tyr(POH)-OH2也实现了商业化，这个氨基酸虽然没有保护磷酸但是也很是实用，

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尤其是在合成短肽到中等长度的磷酸肽时。但是如果肽序列中有两个相邻的Tyr(POH)残基

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时，用未保护的Fmoc-Tyr(POH)-OH来合成时会生成焦磷酸酯3这个副产物。

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丝氨酸和苏氨酸的磷酸三酯在Fmoc/tBu合成策略中不适用，因为当用哌啶处理时会发

生β消除反应，各自生成脱氢丙氨酸和脱氢氨基丁酸（图一）。正因为这个原因，很长时间

人们都认为单体法不能应用在制备含这些氨基酸的多肽中。幸运的是，1994年Wakamiya用

一个单保护的氨基酸衍生物如Fmoc-Ser(PO(OBzl)OH)-OH4来参与反应，副反应几乎完全抑

制。相应的还有苏氨酸的衍生物，大量的文献验证了这些氨基酸的作用。

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图一经β消除过程的脱氢氨基酸的形成

2.2注意事项

以下注意事项适用于使用Fmoc-Ser(PO(OBzl)OH)-OH,Fmoc-Thr(PO(OBzl)OH)-OH,

Fmoc-Tyr-(PO(OBzl)OH)-OH和Fmoc-Tyr(POH)-OH来合成磷酸肽。

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1.在肽链中引入这些衍生物时最好用OBt或OAt酯，生成相应的脲鎓或磷鎓的活性试剂（第

三章条目11中提到），接下来用磷酸氨基酸去连接，反应会比较缓慢，建议用TNBS

或Kaiser检测来监控反应终点（第三章条目14）。当连续偶联磷酸氨基酸时会出连接困

难，这时就需要重复连接。

2.可以选用哌啶/DMF脱除Fmoc（第三章条目7），目前用DBU去保护时，单苄酯磷酸丝

氨酸和磷酸苏氨酸的稳定性还不确定。

3.用95%TFA处理1-3小时可以正常脱除侧链苄基，如果苄基很多则可能需要更长时间。

裂解液中如果含有三烷基硅烷会结果更好，例如：TFA/TIS/water(95:2.5:2.5)（第三章条

目16）

4.磷酸氨基酸的引入会对正常序列的连接产生很大影响，有些可以正常组装的多肽会因为

磷酸氨基酸的引入而变得困难。这时，先完成肽链合成再磷酸化会是更好的选择。

2.3举例

2.3.1应用Fmoc-Tyr(POH)-OH合成H-Ala-Pro-Gly-Asp-Ala-Tyr(POH)-Gly-Pro-

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Lys-Leu-Ala-NH

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