疟原虫检测标准操作程序.pdf

1.检验目的与原理

1.1检验目的：检查血液中是否有疟原虫。

1.2检验原理：瑞氏染色原理：瑞氏染料中含有美蓝和伊红两种染

料，前者为碱性，后者为酸性，它们与细胞内的各种物质具有不同的

亲和力，使其显现出不同的色调，以便于辨认。根据瑞氏染色的酸碱

物质染色性不同，可讲疟原虫各期的形态进行清楚染色，便于观察，

高倍镜下一般可以观察到各种类型的疟原虫（常见间日疟、三日疟、

恶性疟），疟原虫的各期，如环状体（早期滋养体），晚期滋养体，

裂殖体、配子体等。

2.样本收集和贮存

2.1原始样本系统：全血。

2.2标本类型：EDTA抗凝血2ml,标本的采集应使用标准一次性采

血管，充分混匀，勿震荡。

2.2保存条件：EDTA抗凝血尽快即时检测。

2.4病人要求：必须是发烧时采血。

3．试剂

3.1瑞氏染液：

3.1.1试剂成分：瑞氏染料1.0g

无水甲醇500ml

甘油10ml

3.1.2瑞氏染液配制方法：将瑞氏染料称量好后，放在乳钵中加少

量无水甲醇匀速研磨至溶解，将研磨好的染液倾倒入试剂储存瓶中，

倒入无水甲醇继续研磨，反复多次，直至乳钵中无瑞氏染料沉淀为止，

染液试剂瓶存满为止。将配制好的染液放在37℃24小时后方可使用，

放在阴凉干燥处，避光保存。

3.2磷酸盐缓冲液PH6.4

3.2.1脱水Na2HPO41份:处理方法将Na2HPO4于蒸发皿上干

(火燃烘烤）成粉末称量。

3.2.2无水KH2PO42.6份

将脱水Na2HPO41份和水KH2PO42.6份充分混合，边研磨边

混匀。

3.2.3将上述粉末1g加溶解于500ml去离子水中，混合均匀，方

可使用。

3.3器材：载玻片、加样枪、吸头、推片器

4.仪器

显微镜OLYMPUS型号：CX21。

4.1开机前检查

4.1.1OLYMPUS显微镜：检查显微镜光路系统，目镜、物镜镜头

正常，聚光器、光圈、螺旋、微螺旋调节正常。

4.2日维护：每日清理纤维镜表面，保持显微镜光圈、聚光器干净

整洁；每日下班前无水乙醇（二甲苯少用，有致癌性）清洗所有显微

镜物镜（低倍镜10，高倍镜油镜）、目镜。

5.操作步骤

薄血片法

5.1取材：EDTA抗凝静脉血、耳血、手指血

5.2血涂片制备：取耳血或指血静脉血一滴置于载玻片一端，用推

片以30～450均匀推成厚薄适宜，头体尾清楚、长度3～5cm的血膜

（血膜边缘距1cm左右），注意：耳血手指血第一滴血要去掉，静脉

血要充分混匀后吸取适量涂片。

5.3瑞氏染色：（1）将制好的血涂片放在染色架上，加瑞氏染液

4～5滴，静置1分钟左右，加磷酸盐缓冲液6～8滴，洗耳球混匀染

液，染色约10～15分钟，水流轻轻冲掉染液，吸水纸吸干血涂片上的

水分，晾干待检。

5.4镜检

5.4.1低倍镜观察：血涂片先在低倍镜下观察，查看染色是否满意，

选择红细胞分布分均，细胞形态清晰可辨的区域高倍镜下检查。

5.4.2油镜观察：当看到疟原虫各期阶段或某一阶段时（如环状体

).

当镜下没有找到典型各阶段的疟原虫时，油镜镜检，看100个以

上视野，仍没有找到典型疟原虫时人，报告：未找到疟原虫。

5.5报告书写，内容包括：

阳性时：报告找到疟原虫（某一期）

阴性时：报告未找到疟原虫。

6.质量控制

参加每年卫生部3次形态学室间质评工作。