虫草素对动脉硬化闭塞患者血管平滑肌细胞增殖及ERK1／2蛋白表达的影响.pdfVIP

２０１８年３月第３９卷第５期ＧｎａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌＭａｒ．２０１８，Ｖｏ１．３９，Ｎｏ·５７０５·

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虫草素对动脉硬化闭塞患者血管平滑肌细胞

增殖及ＥＲＫ１／２蛋白表达的影响术

许托，罗雨，税晓容，张智，陈小东

广东医科大学附属医院血管甲状腺乳腺外科（广东湛江５２４００１）

【摘要】目的观察虫草素对动脉硬化闭塞（ＡＳＯ）患者下肢动脉原代培养血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）增

殖及ＰＣＮＡ、ＥＲＫ１／２蛋白表达的影响，探索不同浓度虫草素对原代ＶＳＭＣ增殖影响的剂量一效应关系以及

ＭＡＰＩ（／，ＥＲＫ１／２信号通路在其中所发挥的作用。方法收集ＡＳＯ患者下肢截肢标本分离动脉平滑肌，用贴

壁法原代培养ＶＳＭＣｓ。取生长较好的第４～８代ＶＳＭＣｓ，培养到６０％～７０％时，换用无血清培养液饥饿培养

２４ｈ，使细胞同步于静止期。采用不同浓度虫草素（０、１５、４５、７５、１２５、２５０／ｚｍｏ］．／Ｌ）单独或加入ＰＤ９８０５９阻断

ＭＡＰＫ／ＥＲＫ１／２通路后联合使用不同浓度虫草素处理。用ＣＣＫ一８法检测ＶＳＭＣｓ增殖，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ测定ＰＣ—

ＮＡ、ＥＲＫ１／２蛋白的表达。结果虫草素作用后的ＡＳＯ患者ＶＳＭＣｓ的增殖能力下降，并且随着药物浓度的

增加，ＶＳＭＣｓ增殖活力越低，差异有统计学意义（尸＜０．０５）。虫草素对ＡＳＯ组ＶＳＭＣｓ增殖活力的影响基本

上与未加ＰＤ９８０５９阻断ＭＡＰＫ／ＥＲＫ１／２信号通路时的结果相同。虫草素作用ＡＳＯ组ＶＳＭＣｓ２４ｈ后，细胞

ＰＣＮＡ蛋白的表达下降，且随药物浓度的增加，表达越低（Ｐ＜０．０５）；药物浓度在２５０￣ｍｏｌ／Ｌ，ＥＲＫ１／２蛋白表

达下降，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。虫草素对ＡＳＯ患者ＶＳＭＣｓ的增殖活力、ＰＣＮＡ表达的影响不能被

ＰＤ９８０５９所抑制，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）；浓度在２５０￣ｍｏｌ／Ｌ时，虫草素下调ＡＳＯ组ＶＳＭＣｓＥＲＫ的

表达，这一作用能被ＰＤ９８０５９强化，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论虫草素对ＡＳＯ患者ＶＳＭＣｓ的异

常增殖具有显著抑制作用，其发挥作用可能不止通过ＭＡＰＫ／ＥＲＫ１／２信号通路进行传导，可能还存在其他相

关机制。

【关键词】虫草素；血管平滑肌细胞；增殖活力；增殖细胞核抗原；ＭＡＰＫ／ＥＲＫ１／２信号通路；动脉硬

化闭塞

下肢动脉硬化闭塞（ＡＳＯ）是由于下肢动脉粥样ＭＡＰＫｓ）是一组广泛存在于多种细胞内并具有丝氨

硬化斑块形成，引起下肢动脉狭窄、闭塞，进而导致酸／苏氨酸激酶活性的蛋白质，是细胞因子、生长因

肢体慢性缺血。在西方国家５５—７５岁人群中发病子介导细胞增殖效应中最重要的细胞内信号转导途

率高达１７％，每年导致成千上万的患者发生肢体残径。ＥＲＫ通路是ＭＡＰＫ信号转导通路中重要枢

疾。随着我国人口老龄化到来，动脉粥样硬化相纽，是细胞因子介导细胞增殖效应中最重要的途径，

关疾病明显增多。虽然外科搭桥术、经皮血管成形对血管再狭窄发生有重要意义Ｊ。有研究提示虫

术、血管移植术等技术治疗动脉粥样硬化所致血管草素是通过抑制ＥＲＫ１／２信号通路来抑制细胞增殖

狭窄取得了较好效果，但血管再狭窄严重影响了远的。因此本研究２０１５年７月至２０１７年２月主

期疗效。血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）迁移和增殖是要通过观察虫草素对ＡＳＯ患者ＶＳＭＣｓ增殖及ＰＣ—

引起新生内膜增厚、管腔狭窄的主要原因之一＿２］。

ＮＡ、ＥＲＫ蛋白表达的影响，探索虫草素是否通过

因此，探索ＶＳＭＣｓ迁移和增殖的分子机制，对揭示ＭＡＰＫ／ＥＲＫ１／２信号通路来发挥作用。

ＡＳＯ的发病机制有重要作用。虫草素（ｃｏｒｄｙｃｅｐｉｎ）