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（IL-32）分子克隆巨噬细胞肿瘤坏死因子论文
代理，不涉版权。作者如有疑义，请联系版权单位或学校。
【摘要】结核病是一种由结核分支杆菌感染而引发的慢性肉芽肿
性炎症。该病属人畜共患疾病，病原菌一旦侵染可感染人畜全身多个
器官，危害极大。近年来，结核病的发病率在全球范围内一直呈上升
趋势，特别是牛结核疫情的加重不仅威胁动物群体健康，更加威胁人
类身体健康，因此生产转基因抗结核牛具有重大意义。目前国内转基
因动物技术已达到一定水平，但选择合适的用于转基因动物的基因仍
不多。本研究克隆的牛白细胞介素32（Interleukin-32，IL-32）基
因是近年发现的一种新型功能基因，其主要作用是诱导其他细胞因子
和化学因子的产生，并在自身免疫性炎症性疾病中发挥重要作用。目
前已经发现IL-32具有抑制结核分支杆菌（Mycobacterium）等多种
分支杆菌感染，提高动物机体抗病能力的作用。结核分枝杆菌可以从
人类单核细胞和巨噬细胞中通过半胱天冬酶-1/IL-18/Interferon-
γ-依赖机制诱导IL-32的产生，在人巨噬细胞中，IL-32的高表达，
可显著降低宿主细胞内结核杆菌的存活率。本研究分析了牛IL-32β
在秦川牛不同组织中的表达情况，牛IL-32β在秦川体内主要分布于
脾脏和肾脏，其他组织目前尚未发现。并从秦川牛脾脏中分子克隆了
牛IL-32β基因的可变剪接体牛IL-32γ基因，序列分析表明，牛
IL-32γ比牛IL-32β序列多了第二个内含子，从而导致编码序列多
编码47个氨基酸。构建牛IL-32γ的原核表达载体，并在大肠杆菌
BL21(DE3)中表达出该蛋白，摸索蛋白表达条件，IPTG浓度为1mg/mL，
℃时，表达效果较好。成功的表达该目的蛋白为制备多克
隆抗体打下了一定基础。为制备其单克隆抗体提供参考。为了进一步
研究该可变剪接体的功能，本研究构建了真核表达载体pIRES-IL32
-GFP，将该载体稳定转染至小鼠巨噬细胞RAW264.7，得到超表达
牛IL-32γ基因的小鼠巨噬细胞系，同时以稳定转染人IL-32γ基因
的小鼠巨噬细胞为阳性对照，Real-timePCR检测表明，超表达IL-32
γ的细胞具有调节IL-1β、IL-6、MIP2、TNFα等细胞因子表达的功
能，其趋势与阳性对照人IL-32γ的趋势相近。。本研究为进一步研
究牛IL-32γ基因生物学功能提供了重要依据。
【关键词】牛；白细胞介素；32（IL-32）；分子克隆；巨噬细胞；
肿瘤坏死因子α；
牛白细胞介素32基因β、γ亚型的分子克隆与功能
【篇名】
验证
【目录】牛白细胞介素32基因β、γ亚型的分子克隆与功能验
证摘要6-7ABSTRACT7-8文献综述12-20第
一章白细胞介素32基因研究进展12-201.1IL-32的生物
学特性12-131.1.1IL-32的来源121.1.2IL-32的
亚型12-131.2IL-32的生物学功能13-151.2.1
IL-32诱导细胞因子产生炎症反应13-151.2.2IL-32介导
T细胞凋亡151.3IL-32的受体及信号转导
15-161.4IL-32与疾病发生16-201.4.1IL-32与类
风湿关节炎16-171.4.2IL-32与克罗恩病171.4.3
17-181.4.4IL-32
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