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猪链球菌的实验室分离与鉴定

猪链球菌病（SwineStreptococcosis）是危害养猪业的

一种常见传染病。在我国，对猪危害最严重的以C群兽疫链

球菌为主，其次是D群，L群、S群和R群也可引起，E群

主要引起关节炎和淋巴结脓肿。猪链球菌病在临床上可分为

败血症型、脑膜炎型、关节炎型、淋巴结脓肿型等。哺乳仔

猪和刚断乳仔猪发病主要以败血症型、脑膜炎型为主，发病

率和死亡率均较高。肥育猪发病多以关节炎或淋巴结脓肿为

特征，其死亡率较低，但影响生长发育。2005年12月，郑

州南郊某猪场仔猪流行关节炎及败血症，多为2～6周龄仔

猪;病猪精神不振，食欲减少或废绝，体温40.0℃～41.5℃，

呈稽留热，眼结膜潮红，眼睑稍水肿;多数病猪呼吸迫促;部

分仔猪有关节炎症状，关节肿胀、疼痛、后肢不能站立;个别

猪突然发病，出现神经症状;病死猪腹侧皮肤及皮下瘀血，血

液呈暗红色，凝固不良，肺呈红色，体积增大，切面有大量

的红色泡沫，脾、肝局部瘀血、肿胀，呈暗红色，肠系膜淋

巴结肿大，胃底部出血，四肢关节腔滑液多且浑浊。根据临

床及剖检，初步诊断为猪链球菌病，并无菌采取关节炎病猪

的关节液及败血症病猪的肝、脾、肺及肠系膜淋巴结，经实

验室分离鉴定，证实为猪链球菌。现将分离鉴定结果报告如

下。1试验材料1.1病料无菌采患关节炎病猪的关节液，无

菌采集急性死亡的病猪心血、肝、肺、脾及肠系膜淋巴结等

病料。1.2试剂染色液、常规试剂自行配制。1.3培养基生化

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实验用培养基、营养肉汤培养基、普通营养琼脂培养基和血

清肉汤培养基按常规方法配制，鲜血琼脂平板由郑州牧专实

验设备管理科提供。1.4药敏纸片由郑州牧专实验设备管理

科提供。1.5试验动物健康小白鼠10只，由郑州牧专动物医

药系实验动物中心提供，观察一周，健康者做动物致病性实

验用。2方法2.1涂片镜检无菌采集急性死亡的病猪心血、

肝、肺、脾及肠系膜淋巴结等病料，制作肝脏、脾脏的触片，

用关节液、心血涂片，干燥、火焰固定后进行革兰氏染色镜

检。2.2细菌分离培养无菌采集的肝、肺、脾及肠系膜淋巴

结、关节液等病料分别划线接种鲜血琼脂平板，37℃培养

24～48小时后，观察菌落特征，选取鲜血琼脂平板上微小、

圆形、边缘整齐、略带灰白色、露滴样、有明显的β型溶血

环的单个菌落的小部分革兰氏染色、显微镜检查呈成对或短

链状革兰氏阳性球菌后，菌落的其余部分再分别接种于普通

琼脂斜面培养基、血清肉汤培养基、营养肉汤培养基，置37℃

温箱内培养24～48小时，如此获得分离菌的纯培养物及在

不同培养基上的生长情况。2.3培养特性检查观察其在不同

培养基上的生长情况，并涂片、染色、镜检。将纯培养物接

种于鲜血琼脂斜面培养基，分别置于37℃、10℃和45℃条

件下培养24～48小时，观察其能否生长。2.4生化试验特

性检查分离菌血清肉汤培养物分别接种于各种生化培养基，

37℃培养24～48小时后，观察其生化反应特性。2.5药敏

试验采用纸片扩散法，根据药敏试验要求的距离，用无菌棉

签蘸取分离菌的肉汤培养物，涂布法接种于琼脂平板;待稍干

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后，用无菌镊子将各种药敏纸片分别平贴在培养基表面，

37℃培养20～24小时，观察结果，分别测定抑菌环的直径。

判定标准：抑菌环直径在15mm以上为高度敏感，10～

15mm为中度敏感，10mm以下为低度敏感，无抑菌环为

不敏感。2.6动物试验健康小白鼠10只，随机分为2组，每

组5只，其中一组无菌吸取上述肉汤培养物0.5ml/只分别腹

腔注射作为实验组;另外一组5只小白鼠接种无菌生理盐水

做对照。每天观察其死亡和发病情况。3结果3.1涂片镜检

革兰氏染色、显微镜检查为革兰氏阳性球菌，呈成对或短链

状排列。3.2培养特性37℃培养24小时后，在鲜血琼脂平

板上形成半透明、表面光滑、微隆起的灰白色露珠状的小菌

落，外层有明显的p溶血环，生长良好;在普通琼脂平板上菌

落贫瘠，比血琼脂平板小;在