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农产品与食品质量检测技术教学资源库
《农产品/食品质量安全检测技术》课程-微教材
微课编号W5405微课名称HPLC-UV检测糖果中色素的含量
所属模块
添加剂含量检测子模块色素的检测
（章节）
关键词高效液相色谱，紫外检测器，合成色素
是否通用通用农产品√食品是否重点建设√是否
微课类型实验实训型微课形式混合拍摄式教学设计模式任务驱动法
了解紫外检测器的结构及工作原理；
教学目标
掌握高效液相色谱操作步骤
知识点技能点
教学内容1、高效液相色谱仪器结构组成；1、高效液相色谱规范操作步骤
2、紫外检测器的结构与工作原理2、高效液相色谱使用注意事项
知识讲解
食品着色剂最常用检测技术是色谱技术，其中高效液相色谱由于分离效能高、分析速度快
及应用范围广等特点，被广泛应用于食品着色剂的检测中。今天我们将来学习下高效液相色谱
紫外检测法对糖果中日落黄、亮蓝含量的检测。依据中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T1743-2006。
一、高效液相色谱检测器
高效液相色谱法（HPLC）是基于流动相中各组分与固定相发生作用的强弱不同以及固定
相中滞留时间不同进行分离分析的方法。仪器通常由储液瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测
器和数据处理系统等构成。高压输液泵将储液瓶中的流动相以稳定流速输送至分析体系中，样
品从进样器中进入，随流动相进入色谱柱中，在色谱柱中各组分被分离，并按先后顺序进入检
测器，记录仪将进入检测器的信号记录下来，得到液相色谱图。
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（一）检测器定义与分类
检测器是高效液相色谱的重要部件，是用来检测经色谱柱分离后的流出物组成和含量变化
的装置。常见检测器有紫外光度检测器、荧光检测器、电化学检测、化学发光检测器、示差折
光检测器等。其中紫外检测器是HPLC应用最广的检测器，其工作原理是基于朗伯-比尔定律，
可以对那些在紫外、可见光波长下有吸收的物质进行测定。
（二）紫外检测器工作流程
其工作流程是光源（氘灯，波长在190-600nm连续可调）发射的光经过聚光透镜聚焦，
由可旋转组合滤光片滤去杂散光，再通过入射狭缝至平面反射镜M1，经反射后到达光栅，光
栅将光衍射色散成不同波长的单色光。当某一波长的单色光经平面反射镜M2反射至光分束器
时，透过光分束器的光通过样品流通池，最终达到检测样品的测量光电二极管。被光分束器反
射到达检测基线波动的参比光电二极管。比较二者可获得测量和参比光电二极管的信号差，此
即为样品的检测信息-吸光度。
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（三）紫外检测器优点
紫外检测器具有灵敏度高（最小检出量可达到ng数量级）、噪声低、线性范围宽、应用广
泛，对流动相的流速和温度变化不敏感，适用于梯度洗脱，结构简单，使用维修方便，能与其
他检测器串联等优点。采用紫外检测器的HPLC可同时检测人工合成色素柠檬黄、苋菜红、胭
脂红及日落黄等。在不同时间段可分别用各组分的最佳检测波长进行检测，此法不仅灵敏度高，
还能克服梯度洗脱时的基线漂移，减少共存物的干扰。
边学边练
下面，我们示范用HPLC-UV
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