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包被细胞培育板的相关问题

培育板的包被及相关问题：为了适应不同的试验需要，可对培育板用不同的物质进展包被后使用，这其中有促进细胞黏附的，也有用于一些特别检测需要的。不同的试验目的可能具体的方案亦不同，依据需要敏捷把握。

(一)多聚赖氨酸包被：

问：我要培育原代神经细胞培育，要用多聚赖氨酸铺细胞培育板，请问赖氨酸液怎么配，怎样铺扳子

答：配制0.01%的多聚赖氨酸:首先买来sigma公司的多聚赖氨酸，如是25mg，就需要250ml三蒸水，用移液管将少量三蒸水加到多聚赖氨酸的小塑料瓶中，然后将溶解的多聚赖氨酸加到200ml左右三蒸水中，(已置烧杯中)。最终加三蒸水达250ml，过滤除菌分装与小瓶中即可。保存于-20度，近期用的话可放于4度冰箱内保存。留意每一小瓶的量不要太满，假设20ml的瓶子，只装15ml可，假设太满，放于

-2度有可能会将瓶子弄碎，因冻后体积增加。(我就有这个教训)另外烧杯，小瓶、移液管都要灭菌处理的，泡酸高压什么的。我们用的是

一种用注射器过滤的过滤器，一次性的。一个能最多有效过滤200ml。铺板的操作:首先要在消毒试验室，包括超净台，紫外消度20-30

分钟。消毒后30分钟进入试验室。事先预备100ml三蒸水，经高压灭菌处理。具体细节就不多说了。

首先翻开板子，用消毒好的试管将0.01%的多聚赖氨酸参加每一孔中，或许每孔3-4滴吧。将板子盖好放到培育箱中(37度5%CO2)30分钟。

取出板子，用吸管将多聚赖氨酸吸出。换吸管，参加三蒸水，冲洗三次，马上每孔内参加三蒸水，没过底，多点也行。再将水吸出来。反复三次。留意换吸管，要无菌操作的。

最终将铺好的板子放于培育箱待用。

假设你做免疫组化，需要放小的玻片到孔内，就在加多聚赖氨酸之前用无菌的镊子将无菌的玻片夹到孔内即可。

问：PLL的分子量有3-5万，7-15万，15-30万几种，应怎样选择？？感谢：〕

答：我们养神经细胞，用的是分子量3万到7万的pll。

以PBS配成1mg/ml的母液，－20度保存。使用时，用高纯度的蒸馏水稀释成0.11mg/ml的使用浓度，过滤除菌，以50微升每平方厘米的量均匀涂于培育底物的外表，室温下静置5min，吸除多余液体，股风吹干即可。

问：多聚赖氨酸包被培育板后看上去应当是什么样的？？要做原代培育，为了促进细胞贴壁，拟用PLL包被培育板。

我买的是博士德分装Sigma的10ml的那种，可是院子里搜了一下，有人说没有做过细胞培育试验，不确定能否用于细胞培育！！这怎么办，不能用么？

我的方法是这样的，取了0。5ml，参加5毫升灭菌去离子水后，分成6份0.9ml，6孔板里放上玻片〔预备以后做免疫组化直接取片子的〕，一个孔一份，室温5分钟后吸掉液体，超净台内吹干过夜。其次天D-Hank”s液洗3遍，晾干，紫外线照一会儿再用。请问这样做有没有硬伤？？

包被好后的板底及玻片应当是什么样的呢？？我觉察板子干了以后，上面有些白点点，一开头以为是水滴，后来觉察不是。莫非是PLL，那也是不是太夸大了？？请问这种现象正常否？？

PDL有用于组化玻片包被的不能用于细胞培育，你在用前需先确定是细胞培育级的，细胞培育板用PDL包被完后是看不出什么的，假设有颗粒是PDL在配制是未完全溶解，可看一下说明书。

我包被完用无菌水洗板子2－3次，吹干后很干净，以前用PBS洗，吹干后也觉察有白点，考虑是PBS中的盐沉淀。

(二)明胶包被：

问：在细胞原代培育时，在培育瓶里铺明胶，国产的明胶也以可用吗？它是用什么配置呢？还有怎么消毒明胶呢？请多指教，感谢！

答：国产明胶不太好用，明胶可以用PBS溶液溶解，一般在100度煮15分钟，趁热分装，分装后放在4度，不要冰冻。

问：明胶消毒之后可以放置多长时间？还是现配现用呢？你说的分装是指直接铺在培育瓶吗？假设不是的话，放在4度冰箱不是已经固定了吗？固定之后有怎么铺在培育瓶呢？由于是没做过试验所以很不明白。

答：sigma有现成的终浓度是2%的明胶，已消毒，买来即可使用，便利而且不贵，仅100多块钱。4度时明胶是胶冻状，室温下放置20-

30分钟就可变成液态，说明书上建议使用的包被密度是5-10ug/cm2。国产明胶就可以的，用去离子水配成1%即可。可以一次配50ml

或100ml。使用时取你所需量高压灭菌即可。灭菌完毕取出稍凉就可以铺在培育瓶中。

问：明胶包板完毕后，培育皿要枯燥呢还是保持潮湿？

答：明胶包被培育板或培育瓶24小时后，将明胶倒掉，用培育基冲洗，就可以接种细胞了。

问：在园里搜寻了一下关于明胶在细胞