（正式版）-B-T 43169-2023 马铃薯斑纹病菌检疫鉴定方法.docxVIP

ICS65.020.20

CCSB16

中华人民共和国国家标准GB/T43169—2023

马铃薯斑纹病菌检疫鉴定方法

DetectionandidentificationofCandidatusLiberibactersolanacearum

2023-09-07发布

2024-04-01实施

国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

发布

I

GB/T43169—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草原则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。

本文件起草单位：中国检验检疫科学研究院、广州海关技术中心、上海海关动植物与食品检验检疫

技术中心、满洲里海关技术中心、中华人民共和国银川海关。

本文件主要起草人：魏霜、丁钿、赵文军、田茜、易建平、刘玮琦、胡诗瑶。

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GB/T43169—2023

马铃薯斑纹病菌检疫鉴定方法

1范围

本文件描述了马铃薯斑纹病菌的检疫鉴定方法。

本文件适用于茄科和伞形科等植物的种子、种苗、块茎、块根等植物材料以及传播介体木虱中马铃

薯斑纹病菌的检疫鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成文本必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于

本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4马铃薯斑纹病菌基本信息

中文名称：马铃薯斑纹病菌

拉丁学名：CandidatusLiberibactersolanacearumLieftingetal.,2009

英文名称：zebrachipdisease,zebracomplex

中文异名：斑马片病、马铃薯斑纹片病菌

同物异名：CandidatusLiberibacterpsyllaurousHansenetal.,2008

分类地位：原核生物界(KingdomMonera),变形菌门(Proteobacteria),a-变形菌纲(Alphapro-teobacteria),根瘤菌目(Rhizobiales),叶杆菌科(Phyllobacteriaceae),韧皮部杆菌属(Candidatus

Liberibacter)。

马铃薯斑纹病菌其他信息见附录A。

5方法原理

马铃薯斑纹病菌目前还无法培养，因此方法原理为采用马铃薯斑纹病菌特异性引物或探针，通过普通聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)、巢式PCR或实时荧光PCR方法进行检测。

6仪器设备和主要试剂

6.1仪器设备

6.1.1实时荧光PCR仪

支持寡核苷酸探针(TaqMan)双标记水解探针，温度控制范围为30℃~100℃。

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GB/T43169—2023

6.1.2PCR仪

温度控制范围为4℃~99℃。

6.1.3核酸分析仪

波长为230nm～260nm。

6.1.4超净工作台

洁净等级100级，过滤效率达到99.99%。

6.1.5电泳仪

电压10V～300V,最小可调1V;电流4mA～400mA,最小可调1mA。

6.1.6凝胶成像分析仪

紫外透射波长为302nm。

6.1.7研磨机

转速为50r/min～600r/min。

6.1.8台式小型离心机

转速≥12000r/min。

6.1.9旋涡振荡器

转速为200r/min～3000r/min。

6.1.10微量进样器

量程为0.2μL～2.5μL、1.0μL～10μL、10μL～100μL、100μL～1000μL。

6.1.11电子天平

精确度为0.001g。

6.1.12水浴锅

温度控制范围为室温至100℃。

6.1.13纯水仪

制备出的纯水水质应符合GB/T6682中一级水的规格。

6.1.14高压灭菌器

最高工作温度不低于121℃。

6.2主要试剂

除另有规定外，所有试剂均为分析纯。磷酸缓冲盐溶液(phosphatebufferedsaline,PBS)、液氮、聚乙二醇辛