人甲胎蛋白（AFP）说明书.pdfVIP

人甲胎蛋白（AFP）说明书

人甲胎蛋白（AFP）酶联免疫分析(ELISA)

试剂盒用说明书

本试剂仅供研究用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中甲胎蛋

白（AFP）的含量。

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人甲胎蛋白（AFP）水平。用纯化的人甲胎蛋

白（AFP）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入甲胎蛋白

（AFP），再与HRP标记的甲胎蛋白（AFP）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，

经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化转化成蓝色，并在酸的作用

转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的甲胎蛋白（AFP）呈正相关。用酶标仪在

450nm波长测定吸光度（OD），通过标准曲线计算样品中人甲胎蛋白（AFP）浓度。

试剂盒组成：

试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份

封板膜2片（48）2片（96）

密封袋1个1个

酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：45μg/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保

存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃

保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保

存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩

洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存

样本处理及要求：

1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上

清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，

离心

20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该

再次离心。

3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保

存过程

中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-

3000转/

分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，

细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以细胞破坏并放出细胞内成份。离心20

分

钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离

心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻

保存备

用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀

浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后

一份待检测，其余冷冻备用。

6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

马上

进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤：

1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别

加标

准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第

二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，

混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第、第六孔中，

再在第、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第、第六孔中各取

50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后

从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释

液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分

别为30μg/L，20μg/L，10μg/L，5μg/L，2.5μg/L）。

2.