现代分析测试技术-HPLC-2.pdf

2009-6-23

液相色谱的方法开发

分离机理及色谱柱

选HPLC参数时的基本考虑

溶解度-选择流动相的条件

分子量-在样品预处理或GPC分析时有用

官能团-有否离子化基团?保留特性如何?

样品的基质-考虑如何前处理

在基质中样品的含量-分析、制备都考虑

检测特性-有否紫外吸收?荧光?

找出样品中不同组份之间的差异

摸索条件的重要线索

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极性问题

溶剂

极性非极性

水甲醇异丙醇乙腈THF乙酸乙酯CHClCHCl己烷

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NH3X/ArOH/RCOOHCNH2ROHRCN醛/酮N(R)2NO2卤代烷烃烷烃

COOCHCOOCH33

样品的官能团

CH3

液相色谱的分离机理

正相

反相

体积排除

离子交换

其他

不同的分离模式是不同的机理

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吸附色谱的分离机理

•随着样品在固定

相上的吸附能力相上的吸附能力

由大到小

•在色谱柱上的保

留由长到短

吸附色谱多为“正相色谱”，即固

定相的极性大于流动相的极性

吸附色谱概述

分离基于样品的极性差异。

洗脱次序∶一般为正相，即：极性低的先

被洗脱

常用的流动相∶

非极性有机溶剂，如己烷

乙酸等为添加剂乙酸等为添加剂

常用固定相∶

硅胶、氧化铝、羟基磷灰石等。

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2009-6-23

分配色谱的分离机理

(A)正相分配低极性化合物

高极性化合物高极性化合物

非极性端

极性端

(B)反相分配

分配色谱多为“反相色谱”，即固

定相的极性小于流动相的极性

分配色谱概述

反相色谱的主要类型，基于分子的极性分离

洗脱次序：一般为反相，即极性高的先被洗脱

常用的流动相：

有机溶剂如甲醇、乙腈，水

应用添加剂，成为离子对、离子抑制方法

常用固定相：

碳十八碳十八、碳八碳八、胺基等基团胺基等基团

反相色谱固定相多为键合相?