4、血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳.pdf

实验四、血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳

目的：熟悉醋纤薄膜电泳方法及其在分离血清蛋白中的应用，了解电泳技术的一般

原理。

原理：

1、电泳：带电质点在电场中移动的现象称为电泳。

影响电泳泳动速度的因素：《生化实验》p.51.

内因：带电性质及电量，质点大小，质点形状

外因：电场强度，溶液pH值，溶液离子强度，电渗现象等

任何一个物质的质点，由于其本身在溶液中的解离或由于其表面对其它带电质点的

吸附，会在电场中向一定的电极移动。例如，氨基酸、蛋白质、酶、激素、核酸及其衍

生物等物之都具有许多可解离的酸性和碱性基团，它们在溶液中会解离而带电。一般来

说，在碱性溶液中（即溶液的pH值大于等电点pI；本实验的pH值为8.6，pI不一样，

样品带电荷也就不一样；选取不合适的pH，会使样品带有不同的正或负电荷，影响电

泳），分子带负电荷，在电场中向正极移动。而在酸性溶液中，分子带正电荷，在电场

中向负极移动。移动的速度取决于带电的多少和分子的大小。

不同的质点在同一电场中泳动速度不同，常用泳动度（或迁移率）来表示。泳动度

的定义是带电质点在单位电场强度下的泳动速度。即：p.53.《生化实验》

泳动度首先取决于带电质点的性质，即质点所带静电荷的量、质点的大小和质点的

形状。一般来说，质点所带静电荷越多，质点直径越小，越接近于球形，则在电场中泳

动速度越快；反之，则越慢。泳动度除受质点本身性质的影响外，还受其它外界因素的

影响，如溶液的粘度等。

影响泳动速度的主要外界因素有下列几种：p.53-56.

一）电场强度

二）溶液的pH值pH值距等电点越远，质点所带静电荷越多，泳动速度也越快；

反之，则越慢。因此分离某一混合蛋白质样品时，应选择一个合适的pH值，使各种蛋

白质所带静电荷的量差异较大，以利于分离。为使电泳过程中溶液的pH恒定，必须采

用缓冲液。

三）溶液的离子强度越高，泳动速度越慢，一般最适离子强度在0.02~0.2之间。

为了保持电泳过程中待分离生物大分子的电荷以及缓冲液pH值的稳定性，缓冲液

通常要保持一定的离子强度，一般在0.02－0.2，离子强度过低，则缓冲能力差，但如

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果离子强度过高，会在待分离分子周围形成较强的带相反电荷的离子扩散层（即离子

氛），由于离子氛与待分离分子的移动方向相反，它们之间产生了静电引力，因而引起

电泳速度降低。另外缓冲液的粘度也会对电泳速度产生影响。

四）电渗现象液体在电场中对于一个固体支持物的相对移动，称为电渗现象（图）。

如，纸电泳，纸上带负电荷，与纸接触的水溶液因为静电感应带有正电荷，在电场的作

用下溶液向负极移动并带动质点向负极移动。电泳时，质点移动的表面速度是质点移动

速度和由于溶液移动而产生的电渗速度的加和。若质点原来向负极移动，则表面速度比

电泳速度快；若质点原来向正极移动，则其表面速度比电泳速度慢。因此，电泳时应尽

量避免使用具有高渗作用的支持物。

由于支持介质表面可能会存在一些带电基团，如滤纸表面通常有一些羧基，琼脂可

能会含有一些硫酸基，而玻璃表面通常有Si-OH基团等等。这些基团电离后会使支持

介质表面带电，吸附一些带相反电荷的离子，在电场的作用下向电极方向移动，形成介

质表面溶液的流动，这种现象就是电渗。在pH值高于3时，玻璃表面带负电，吸附溶

液中的正电离子，引起玻璃表面附近溶液层带正电，在电场的作用下，向负极迁移，带

动电极液产生向负极的电渗流。如果电渗方向与待分离分子电泳方向相同，则加快电泳

速度；如果相反，则降低电泳速度。

2、醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法。

醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。将它溶于有机溶剂（如

丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜（有薄膜的是膜面，无光泽，

无膜的是光洁面），干燥后就成为醋酸纤维薄膜。醋酸纤维薄膜具有泡沫状的结构（三

维立体结构），厚度约120um，有很强的通透性，对分子移动阻力很小，对样品的吸附

作用小（有的材料对样品会有很强的吸附作用）。

醋酸纤维薄膜的