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本实验室Elisa所需试剂器材
1.试剂
(1)包被缓冲液碳酸盐缓冲液(PH9.60.05M)：
NaCO1.59g
23
NaHCO2.93g
3
加蒸馏水至1000ml
作用：稀释抗原（菌悬浮液）
(2)洗涤缓冲液PBST(PH7.40.15M)：
KHPO0.2g
24
NaHPO·12HO2.9g
242
NaCl8.0g
KCl0.2g
Tween-200.05％0.5ml
加蒸馏水至1000ml
作用：洗涤
(3)缓冲液PBS(PH7.40.15M)：
KHPO0.2g
24
NaHPO·12HO2.9g
242
NaCl8.0g
KCl0.2g
加蒸馏水至1000ml
作用：制备封闭液
(4)封闭液：牛血清白蛋白(BSA)0.1g，加缓冲液（PBS）至100ml或PBS加2％BSA
作用：封闭空隙
(5)稀释液：PBST加1％牛血清白蛋白(BSA)
作用：稀释抗体及酶标抗体
(5)HRP羊抗兔IgG一酶标抗体
作用：结合抗体
(6)底物缓冲液磷酸盐柠檬酸(PH5.5):
0.2MNaHPO(28.4g/L)25.7ml
24
0.1M柠檬酸(19.2g/L)24.3ml
蒸馏水50ml
作用：制备TMB
(7)TMB(四甲基联苯胺)使用液:
TMB(10mg/5ml无水乙醇)0.5ml
底物缓冲液(PH5.5)10ml
0.75％HO32μl
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作用：显色
(8)终止液(2MHSO）：蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸(98％)21.7ml
24
作用：终止反应
2.器材:
聚苯乙烯塑料板(酶标板)96孔
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抗原制备：
以平板划线法将供试菌菌接种于普通营养琼琼脂培养基上，28℃培养24h后，挑取单菌落
接种于LB液体培养基中，过夜培养；5000r·min-1离心10min，弃上清；加入1%的甲醛
于37℃灭活24h，通过菌落涂布法检测灭活效果；5000r·min-1离心10min，弃上清，用
9-1
麦氏比浊法，配制出浓度约为1×10cells·mL的菌悬液作为免疫抗原。
抗血清制备：
抗血清不能直接用于包被，应先提取IgG。大量工作表明，只用硫酸铵沉淀就可以得到足够
纯度及高活性的IgG蛋白。其基本步骤如下：
(1)取抗血清0.2ml；
(2)加生理盐水（0.85％NaCl）0.3ml，混匀；
(3)逐滴加入饱和(NH4)SO0.5ml，充分振荡混匀，4℃静置1h；
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(4)10000rpm/min离心20min，弃上清；
(5)加0.5ml生理盐水重悬浮，
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