一种检测基因序列的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN102766688A

(43)申请公布日2012.11.07

(21)申请号CN201210232601.6

(22)申请日2012.07.06

(71)申请人盛司潼

地址518057广东省深圳市南山区高新区科技中二路软件园11栋402室

(72)发明人盛司潼

(74)专利代理机构

代理人

(51)Int.CI

C12Q1/68

G01N21/64

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

一种检测基因序列的方法

(57)摘要

本发明涉及生物基因工程领域，提

供了一种检测基因序列的方法。所述方

法，包括以下步骤：将第一锚定引物锚定

结合于含基因序列的待测核酸片段的第一

接头上，使用连接测序法读取第一锚定引

物延伸末端后的M个核苷酸的序列信息；

利用内切酶将已读取序列信息的核苷酸部

分或完全切除，并在酶切产物上连接第二

接头，得新的待测核酸片段；然后在新的

待测核酸片段的第二接头上锚定第二锚定

引物，再利用连接测序法读取第二锚定引

物延伸末端后N个核苷酸的序列信息；更

换试剂，重复上述酶切、接头连接、锚定

引物结合、连接测序等步骤，得所需的基

因序列信息；本发明通过酶切延伸测序方

法实现了增加检测基因序列的测序读长的

目的。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.一种检测基因序列的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A.将第一锚定引物锚定结合于含基因序列的待测核酸片段的第一接头上；

B.在第一锚定引物延伸末端分别连接带不同位置标记的荧光探针，并检测相应的连

接产物的荧光信号，得到第一锚定引物延伸末端后M个核苷酸的序列信息；

C.利用内切酶将步骤B中已得到序列信息的核苷酸部分或完全切除，得到带有含

有待测序片段的酶切产物；

D.酶切产物连接第二接头得到新的含基因序列的待测核酸片段，将第二锚定引物结

合于新的含基因序列的待测核酸片段的第二接头上；

E.在第二锚定引物延伸末端分别连接带不同位置标记的荧光探针，并检测相应的连

接产物的荧光信号，得到第二锚定引物延伸末端后N个核苷酸的序列信息；

F.更换试剂，对前一步骤的产物进行酶切、接头连接、锚定引物结合、荧光探针连

接和荧光信号检测；

G.重复步骤F，直至得到含基因序列的待测核酸片段中所需的基因序列信息；

其中，M、N均为正整数；所述基因为等位基因或抗肿瘤药物相关基因。

2.根据权利要求1所述的检测基因序列的方法，其特征在于，步骤A中所述第一锚

定引物带有含有至少一个酶切识别位点。

3.根据权利要求2所述的检测基因序列的方法，其特征在于，所述步骤C包括以下

步骤：

C1.将步骤B中连接的荧光探针与第一锚定引物洗脱，重置第一锚定引物并进行链

延伸，与含基因序列的待测核酸片段形成双链核酸分子；

C2.内切酶通过识别第一锚定引物上所带的酶切识别位点并进行酶切，将步骤B中

已得到序列信息的核苷酸部分或完全切除，得到含有待测序片段的酶切产物。

4.根据权利要求1所述的检测基因序列的方法，其特征在于，步骤C包括以下步骤：

C1’.在第一锚定引物的另一端连接双链的第三接头，该第三接头带有含有至少一个

酶切识别位点；

C2’.利用内切酶识别第三接头所带的酶切识别位点，将步骤B中已得到序列信息的

核苷酸部分或完全切除，得到含有待测序片段的酶切产物。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的检测基因序列的方法，其特征在于，所述第

一锚定引物带有含有至少一个特异性残基和/或一端是封闭的。

6.根据权利要求5所述的检测基因序列的方法，其特征在于，所述步骤B包括以下

步骤：

B1.在带有含有特异性残基的第一锚定引物延伸末端连接带特定位置标记的荧光探

针，检测相应的连接产物的荧光