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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利说明书
(10)申请公布号CN1661036A
(43)申请公布日2005.08.31
(21)申请号CN200410065929.9
(22)申请日2004.12.25
(71)申请人王明丽
地址230032安徽省合肥市梅山路安徽医科大学微生物学教研室
(72)发明人王明丽
(74)专利代理机构合肥华信专利商标事务所
代理人余成俊
(51)Int.CI
C12P21/02
C07K14/555
A61K38/21
A61P31/12
权利要求说明书说明书幅图
(54)发明名称
犬白细胞干扰素的制备方法
(57)摘要
本发明公开了一种犬白细胞干扰素
的制备方法，使用鸡新城疫病毒(NDV)作
为诱生剂诱导健康犬白细胞，经培养、灭
活病毒、除菌、分离、纯化等工艺，制成
犬白细胞干扰素冻干粉针剂。本发明成功
利用了犬新鲜全血作为原料，制备工艺简
便及经冻干后易运送和保藏，产品质量可
靠。犬白细胞干扰素注射犬机体后，具有
疗效好、安全可靠和无毒副作用等特点。
可用于治疗犬瘟热、犬细小病毒病、犬病
毒性腹泻等病毒性疾病。
法律状态
法律状态公告日法律状态信息法律状态
权利要求说明书
1.犬白细胞干扰素的制备方法，依次进行以下步骤：
(1)、制备犬的新鲜抗凝血、分离收集白细胞悬液；
(2)、犬白细胞悬液中加入启动用粗纯犬白细胞干扰素进行短时培养；
(3)、加入诱导剂——鸡新城疫病毒NDV，诱生培养18-24小时；
(4)、加入含有犬血清或血浆的营养液进行诱生，培养后，收集上清液，灭活鸡新
城疫病毒、除菌；
(5)得到犬白细胞干扰素粗制品，冷冻保存。
2.根据权利要求1所述的犬白细胞干扰素的制备方法，其特征在于：
(1)、以800～2500rpm离心装有新鲜抗凝血瓶30min，收集灰黄层，得到富含白细
胞的悬液，用已预温的培养液稀释成1×10sup7/sup白细胞/ml；
(2)、在前述已稀释好的细胞悬液中加入少量粗纯犬白细胞干扰素，使其最终浓度
为100单位/ml，置于37℃水浴摇床搅拌培养2小时；
(3)、在启动后的犬白细胞悬液中加入鸡新城疫病毒NDV，使其最终浓度为100～
150血凝单位/ml，并同时在白细胞悬液中加入原全血液1～1.5倍体积量含10％犬
血清或犬血浆的RPMI1640营养液，加入终浓度为10μg/ml的卡那霉素，调悬液
pH7.4～8，37℃摇床搅拌培养18～24小时；
(4)、经2000rpm～3000rpm离心30min，取上清液，加入6NHCl调至pH2.0～2.4，
4℃下放置4～5天，每日振摇2～3次；再用6NNaOH调至pH7.2，即得到犬白细
胞干扰素粗制品。
3.根据权利要求1所述的犬白细胞干扰素的制备方法，其特征在于：
(1)、以2000rpm离心装有新鲜抗凝血瓶30min，收集灰黄层，得到富含白细胞的
悬液，用已预温的培养液稀释成1×10sup7/sup白细胞/ml。
(2)、在前述已稀释好的细胞悬液中加入少量粗纯犬白细胞干扰素，使其最终浓度
为100单位/ml，置于37℃水浴摇床搅拌培养2小时。
(3)、在启动后的犬白细胞悬液中加入NDV，使其最终浓度为150血凝单位/ml，并
同时在白细胞悬液中加入原全血液1.5倍体积量含10％犬血清或犬血浆的
RPMI1640营养液，加入终浓度为10μg/ml的卡那霉素，调悬液pH7.4，37℃摇床
搅拌培养18～24小时；
(4)、经2000rpm离心30min，取上清液，加入6NHCl调至pH2.0，4℃放置4～5
天，每日振摇2～3次。再用6NNaOH调至pH7.2，
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