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蛋白质工程专题知识;想一想;一、蛋白质工程崛起缘由;基因工程在标准上只能生产自然界已存

在蛋白质，这些天然蛋白质是生物在

长久进化过程中形成，它们结构和

功效符合特定物种生存需要，却不一

定完全符合人类生产和生活需要。;;满足人类生产和生活需要;比如．胰岛素改造

天然胰岛素制剂在储存中易形成二聚体和六聚体，延缓胰岛素从注射部位进入血液，从而延缓了其降血糖作用，也增加了抗原性，这是胰岛素B23-B28氨基酸残基结构所致。利用蛋白质工程技术改变这些残基，则可降低其聚合作用，使胰岛素快速起作用。该速效胰岛素已经过临床试验。

;;;温故知新

蛋白质结构及其多样性;蛋白质工程专题知识;①氨基酸种类不一样，肽链结构不一样;蛋白质功效;二、蛋白质工程概念;二、蛋白质工程基础原理;蛋白质功效是DNA决定，那么要制

造出新蛋白质，就要改造DNA，所以蛋白质工程原理应该是中心法则逆推。;;天然蛋白质合成过程按照中心法则进行：;2.原理：中心法则逆推;蛋白质工程基础原理;蛋白质工程流程图;蛋白质工程主要步骤通常包含：

（1）从生物体中分离纯化目标蛋白；

（2）测定其氨基酸序列；

（3）借助核磁共振和X射线晶体衍射等伎俩，尽可能地了解蛋白质二维重组和三维晶体结构;;蛋白质结构测定

一级结构测定：

直接法：直接测定多肽链氨基酸次序。

间接法：从编码蛋白质基因核苷酸次序来推导蛋白质氨基酸次序。

三级结构测定：

X-射线晶体衍射——研究处于晶体状态下蛋白质空间结构

核磁共振(NMR)光谱——研究处于溶液状态蛋白质结构。

;X-射线衍射技术：

用于蛋白质及核酸三维结构确实定，至今已经有数百种蛋白质结构被确定。;;基因定点诱变技术常见方法是PCR法。;;讨论;三、蛋白质工程进展与前景;你知道酶工程吗？绝大多数酶都是蛋白质，酶工程与蛋白质工程有什么区分？;;;;2）改变底物特异性

作为洗衣粉蛋白酶，其分解蛋白种类无疑是多多益善，经过改变枯草芽胞杆菌蛋白酶两个特异性口袋S及S4，能够提升酶底物特异性。

;;;酶稳定性

1.酶稳定分子原因

1）共价键：

肽键（peptidebond）

——稳定蛋白质和酶主链关键力量。

二硫键（disulfidebond）

——由两个Cys侧链-SH氧化而成，是一些蛋白质维持结构稳定性主要原因。;2）非共价键：

疏水相互作用（hydrophobicinteraction）:

是维持蛋白质分子稳定主要作用力。

氢键（hydrogenbond）：

是稳定蛋白质分子空间结构，尤其是二级结构主要力量。;静电相互作用（electrostaticinteraction）：

又称离子键、盐键、盐桥，是正负电荷间作用力。对酶分子稳定性相关盐键大个别形成于分子表面上。

范德华力：

在电中性分子之间非共价结合。分子间形成范德华力越大越稳定。

金属离子：

Ca2+、Mg2+和Zn2+等高价阳离子与多肽链不稳定弯曲个别结合，可显著增加酶分子稳定性。;;;;;