遗传修饰动物模型专家讲座.pptxVIP

;;;;;;1、第一例嵌合体小鼠

1974年最早把猿猴病毒40(SV40)注入小鼠囊胚腔中得到部分组织中含有SV40DNA嵌合体小鼠。但无任何表型改变。

2、第一个转基因小鼠系

1976年建立了世界上第一个转基因小鼠系，这些小鼠基因组中插人了莫氏白血病病毒基因。他们是利用反转录病毒与小鼠卵裂球共培养把外源DNA插入到小鼠基因组中。

3、第一例显微注射法产生转基因小鼠

1980年，Gordn等把SV40DNA显微注射到小鼠受精卵原核中，取得了两只转基因小鼠，创建了显微注射转基因方法。

;4、“超级鼠”1982年，Palmiter和Brinster用此方法把大鼠生长激素基因导入小鼠受精卵，取得了成年体重是对照组小鼠2倍“超级鼠”，首先证实外源基因可在受体中表示，而且表示产物含有生物活性。

5、转基因家畜产生转基因家兔、绵羊和猪(Hammer等，1985)、牛(Bondioli等，1988)和山羊(Ebert等，1991)等相继出世。;10/1/2021;10/1/2021;6、利用转基因生产重组蛋白

1987年，Simons等在转基因小鼠乳汁中得到绵羊β-球蛋白，1988年，该研究小组又从转基因绵羊乳汁中得到了α-抗胰蛋白酶。当前，已经有数十种蛋白实现了转基因生产。

7、转YAC转基因小鼠

近10年内，陆续出现用全长酵母人工染色体（YAC）DNA来产生转基因小鼠。

;东北农业大学－国内首例绿色荧光蛋白“转基因”克隆猪

绿色荧光蛋白－猪胎儿成纤维细胞－克隆

;1987年，世界上第一只商业化转基因绵羊在英国著名罗斯林研究所诞生。转基因母羊乳汁中能够分泌α-抗胰蛋白酶。;年，FDA同意转基因鲑鱼;;（l）疾病型转基因动物

替换：

防止了人体试验造成风险和伦理问题。

潜伏期长，病程长和发病率低疾病

可控：

品系，感染病原体

试验环境

方便：

样品搜集

结果分析轻易（统计）；

人畜共患病比较，研究疾病机理

;（2）利用转基因动物制药：

生物反应器重组蛋白药品

欧洲医药评价署人用医药产品委员会年6月2日首次同意了用转基因山羊奶研制而成抗血栓药品Atryn（抗凝血酶）上市

当前世界上还有利用转基因绵羊、牛和兔乳腺生物反应器生产人α-抗胰蛋白酶（抗蛋白酶缺乏性肺气肿药品）、重组组织血纤维蛋白溶酶原激活剂（抗栓药）和??C1抑制剂（治疗血管神经性水肿药品）等重组蛋白药品也已经完成或进入临床Ⅲ期试验，尤其是治疗性抗体药品，发展潜力更大。

;当前已在以下动物乳汁中生产出一些人类蛋白质药品：

牛：抗凝血酶、纤维蛋白原、人血清白蛋白、胶原蛋白、乳铁蛋白、糖基转移酶、蛋白C等；

山羊：抗凝血酶原、抗胰蛋白酶、血清白蛋白、组织纤溶原激活因子、单克隆抗体等；

绵羊：抗胰蛋白酶、凝血因子Ⅸ、蛋白C；

猪：凝血因子Ⅸ、蛋白C、纤维蛋白原、血红蛋白。;;;目标基因分离与克隆;构建转基因载体;;转基因动物技术路线(续);?转基因动物技术路线（续）;?转基因动物技术路线（续）;;;;;;;;10/1/2021;;绝缘子元件阻断邻近增强子活性

;;;10/1/2021;10/1/2021;10/1/2021;;;;10/1/2021;10/1/2021;10/1/2021;;;;;;;operationpanel;显微注射法

显微注射法是在显微注射仪上，一侧用吸管固定受精卵，另一侧将注射针插入受精卵原核（普通是雄原核）。拔出显微注射针解除固定管负压，操作完成。

;10/1/2021;;;EventsDuringTransgenesis;;10/1/2021;;10/1/2021;;10/1/2021;计算时间;;10/1/2021;10/1/2021;用透明质酸酶处理受精卵细胞团;10/1/2021;;;10/1/2021;;10/1/2021;10/1/2021;在体视显微镜下观察输卵管伞，并用移卵管吸收胚胎，次序为石蜡油、空气泡1、培养液、空气泡2、胚胎(尽可能少带入培养液)。空气泡3、培养液。;10/1/2021;;;;;10/1/2021;10/1/2021;10/1/2021;;;;;10/1/2021;囊胚固定;;;;;;;10/1/2021;10/1/2021;;10/1/2021;;10/1/2021;;;;;ψ;;;;;;;10/1/2021;;10/1/2021;;;;外源DNA导入精细胞方法有DNA与精子共育法、电穿孔导入法、脂质体转染法。;;;;;10/1/2021;10/1/2021;10/1/2021;;;;10/1/2021;;;;;;;;;10/1/2021;;G0代;;;;;;;三种技术融合;;;;10/1/2021;;;;通常意义上基因敲除主要是应