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过氧化物酶专题知识讲座过氧化物酶专题知识讲座第1页

2024/6/29一、试验目标

1.学习红薯过氧化物酶制备方法。

2.掌握过氧化物酶反应原理及测定方法。

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2024/6/29二、试验原理1、过氧化物酶（简称POD)介绍过氧化物酶广泛存在于植物体中，是活性较高一个酶。它与呼吸作用、光合作用及生长素氧化等都相关系。在植物生长发育过程中它活性不停发生改变。普通老化组织中活性较高，幼嫩组织中活性较弱。这是因为过氧化物酶能使组织中所含一些碳水化合物转化成木质素，增加木质化程度，而且发觉早衰减产水稻根系中过氧化物酶活性增加，所以过氧化物酶可作为组织老化一个生理指标。另外，过氧化物同工酶在遗传育种中主要作用也正在受到重视。过氧化物酶专题知识讲座第3页

2024/6/292．酶活力测定(1)酶活力表示酶量多少不能像普通物质那样，用重量(g)或体积(ml)。因为酶是一个生物催化剂。酶存在和含量多少应表达在催化能力大小，即用酶活力(活性)表示。酶活力（酶活性）指酶催化某一特定化学反应能力。催化能力强(大)，酶活力就高(大)，也表示酶量多。酶本身重量不能说明酶实际含量多少。一样重量酶，酶活力能够不一样，活力高，价值就大。过氧化物酶专题知识讲座第4页

2024/6/29(2)酶促反应速度酶活力详细用它所催化某一化学反应反应速度来表示，即在最适条件下(最适pH、最适T)酶催化反应速度愈快，酶活力就愈高。速度愈墁，酶活力就愈低。所以测定酶活力(实质上就是酶定量)测定就是测定酶促反应速度(用v表示)。酶促反应速度可用单位时间内、单位体积中底物降低许或产物增加量来表示。单位：浓度/单位时间常见产物增加量表示，因为它从无到有，改变显著。酶促反应随时间增加，产物增加。过氧化物酶专题知识讲座第5页

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若将产物浓度对反应时间作图得到酶促反应速度曲线。

Vmax时间产物生成量斜率＝浓度/时间＝V过氧化物酶专题知识讲座第6页

2024/6/29从图可知，反应速度只在最初一段时间内保持恒定，伴随反应时间延长，酶反应速度逐步下降。引发下降原因很多，如底物浓度降低，产物浓度增加而加速了逆反应进行，产物对酶有抑制作用等。所以研究酶反应速度以酶促反应初速度为准，即酶促反应最初一段时间，产物呈线性增加时反应速度。详细指酶促反应速度曲线斜率。即从原点对曲线作切线，求切线斜率(v)=浓度/时间过氧化物酶专题知识讲座第7页

2024/6/29因为产物从无到有，只要方法灵敏，可准确测定。测定产物增加量方法很多：化学方法：滴定、比色、气体测压、电化学等。物理方法：UV吸收、荧光等。同位素方法等。过氧化物酶专题知识讲座第8页

2024/6/29(3)酶活力单位表示酶活力大小，也就是酶量大小单位称酶活力单位(U)。国际单位(IU)定义：1个酶活力单位，是指在特定条件下，在1分钟内能转化1微摩尔(μmol)底物酶量，或是转化1微摩尔底物中相关基团酶量。过氧化物酶专题知识讲座第9页

2024/6/293、测定原理过氧化物酶催化过氧化氢氧化酚类反应，产物为醌类化合物，此化合物深入缩合或与其它分子缩合，产生颜色较深化合物。本试验以邻甲氧基苯酚（即愈创木酚）为过氧化物酶底物，在此酶存在下，H2O2可将邻甲氧基苯酚氧化成红棕色4-邻甲氧基苯酚，其反应为：过氧化物酶专题知识讲座第10页

2024/6/29本试验用紫外吸收法测定产物4－邻甲氧基苯酚在470nm光吸收增加值表示产物增加量，划出光吸收-时间速度曲线，求出曲线斜率，即酶促反应初速度，再换算为酶活力。4过氧化物酶专题知识讲座第11页

2024/6/2921345678002468反应时间（分钟）生成物光吸收0.400.300.200.10过氧化物酶专题知识讲座第12页

2024/6/292.pH对酶促反应速度影响(1)影响酶促反应速度原因*底物浓度米氏公式*温度*酶浓度*激活剂、抑制剂*pH过氧化物酶专题知识讲座第13页

2024/6/29(2)pH对酶促反应速度影响大多数酶活力受其环境pH影响。这是因为pH影响底物分子和酶分子中一些基团解离，这些基团离子化状态关系到底物与酶结合、酶专一性和酶活性中心构象。通常各种酶只有在一定pH范围内才含有活性，并在一定pH下，酶促反应含有最大反应速度，此pH称最适pH，高于或低于此值反应速度都下降。过氧化物酶专题知识讲座第14页

2024/6/29如将反应速度对pH作曲线，经典呈钟罩形，但不一样酶受pH影响是不一样