- 1、本文档共85页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
第十章外源基因表达与基因工程药;DNA克隆、测序与重组技术的历;重组DNA技术的发展史1865;重组DNA技术重组DNA技术:;一、重组DNA技术相关概念克隆;技术水平:分子克隆(molec;应用酶学的方法,在体外将各种来;生物技术工程:基因工程、蛋;(二)工具酶限制性核酸内切酶;重组DNA技术中常用的工具酶工;限制性核酸内切酶(restri;与甲基化酶共同构成细菌的限制修;第一个字母取自产生该酶的细菌属;Ⅱ类酶识别序列特点——回文结;BamHⅠGTCCAGGCC;来源不同的限制酶,但能识别和切;有些限制性内切酶虽然识别序列不;名称识别序列;二、DNA连接酶三、DNA聚合;目的基因(targetgen;基因载体定义为;克隆载体(cloningve;载体的选择;可接合质粒如F因子(Ff;质粒(plasmid)特点:;质粒载体分类1、严紧型质粒;无标题;pBR322载体特点特点:1、;无标题;pUC系列载体特点特点:1、分;λ噬菌体DNA改造系统λgt;粘性质粒(cosmid);粘性质粒;粘性质粒;粘性质粒;酵母人工染色体(yea;重组DNA技术基本原理基本原理;以质粒为载;(一)目的基因的获取基因组DN;化学合成法获取目的基因由已知氨;组织或细胞染色体DNA基因片断;限制酶切位点限制酶消化除去;mRNAcDNA双;(二)克隆载体的选择和构建目的;(三)外源基因与载体的连接方式;BamHⅠ切割反应GGAT;不同限制酶切位点(非配伍末端);平端连接限制性内切酶切割产;目的基因载体限制性内切酶限制性;在末端转移酶(terminal;5′3′3′5′载体DNA5′;由平端加上新的酶切位点,再用限;人工接头及其应用CCGAATT;受体菌条件:安全宿主菌;转化作用通过自动获取;例:溶菌时,裂解的DNA片段被;转导作用;常用转化方;1.直接选择法(1)抗药性;(插入失活法)抗药性标记选择;α互补利用α互补原理筛选重组体;无标题;原位杂交;Southern印迹;鸡的β肌球蛋白的克隆和检出免疫;重组DNA技术操作过程可形象归;重组DNA技术操作的主要步骤载;第四节目的基;表达体系的建立:表达载体的;标准:选择标志 ;大鼠胰岛素原cDNA的表达和分;无标题;优点:可表达克隆的cDNA及真;表达载体pFASTBACI的;表达载体YEpIPT的物理图;第五节DNA重组技术在医学中;一、重组DNA技术的应用(一);二、疾病基因的发现与克隆根据基;三、生物制药利用基因工程生产有;重组DNA医药产品产品;基因诊断(geneticdi;基本过程:区分或鉴定DNA的;能正确扩增靶基因;能准确区分单;(二)基因治疗的概念定义基因治;1.产前诊断2.携带者测试
文档评论(0)