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第十章外源基因表达与基因工程药;DNA克隆、测序与重组技术的历;重组DNA技术的发展史1865;重组DNA技术重组DNA技术：;一、重组DNA技术相关概念克隆;技术水平：分子克隆(molec;应用酶学的方法，在体外将各种来;生物技术工程:基因工程、蛋;（二）工具酶限制性核酸内切酶;重组DNA技术中常用的工具酶工;限制性核酸内切酶(restri;与甲基化酶共同构成细菌的限制修;第一个字母取自产生该酶的细菌属;Ⅱ类酶识别序列特点——回文结;BamHⅠGTCCAGGCC;来源不同的限制酶，但能识别和切;有些限制性内切酶虽然识别序列不;名称识别序列;二、DNA连接酶三、DNA聚合;目的基因(targetgen;基因载体定义为;克隆载体(cloningve;载体的选择;可接合质粒如F因子(Ff;质粒(plasmid)特点:;质粒载体分类1、严紧型质粒;无标题;pBR322载体特点特点：1、;无标题;pUC系列载体特点特点：1、分;λ噬菌体DNA改造系统λgt;粘性质粒(cosmid);粘性质粒;粘性质粒;粘性质粒;酵母人工染色体(yea;重组DNA技术基本原理基本原理;以质粒为载;（一）目的基因的获取基因组DN;化学合成法获取目的基因由已知氨;组织或细胞染色体DNA基因片断;限制酶切位点限制酶消化除去;mRNAcDNA双;（二）克隆载体的选择和构建目的;（三）外源基因与载体的连接方式;BamHⅠ切割反应GGAT;不同限制酶切位点（非配伍末端）;平端连接限制性内切酶切割产;目的基因载体限制性内切酶限制性;在末端转移酶(terminal;5′3′3′5′载体DNA5′;由平端加上新的酶切位点，再用限;人工接头及其应用CCGAATT;受体菌条件：安全宿主菌;转化作用通过自动获取;例：溶菌时，裂解的DNA片段被;转导作用;常用转化方;1.直接选择法(1)抗药性;(插入失活法)抗药性标记选择;α互补利用α互补原理筛选重组体;无标题;原位杂交;Southern印迹;鸡的β肌球蛋白的克隆和检出免疫;重组DNA技术操作过程可形象归;重组DNA技术操作的主要步骤载;第四节目的基;表达体系的建立：表达载体的;标准：选择标志 ;大鼠胰岛素原cDNA的表达和分;无标题;优点：可表达克隆的cDNA及真;表达载体pFASTBACI的;表达载体YEpIPT的物理图;第五节DNA重组技术在医学中;一、重组DNA技术的应用（一）;二、疾病基因的发现与克隆根据基;三、生物制药利用基因工程生产有;重组DNA医药产品产品;基因诊断(geneticdi;基本过程：区分或鉴定DNA的;能正确扩增靶基因；能准确区分单;（二）基因治疗的概念定义基因治;1.产前诊断2.携带者测试
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