钙池调控的钙离子内流在高血糖诱导的神经元损伤中的作用机制研究.pdfVIP

钙池调控的钙离子内流在高血糖诱导的神经元损伤中的作用机

制研究

糖尿病(diabetesmellitus,DM)是由遗传和环境因素共同导致的以慢性高

血糖为主要特征的临床综合征。糖尿病可引起多种慢性并发症,导致肾、视网膜

等多器官功能障碍或衰竭,严重者可致残或致死。

有关糖尿病引起的神经系统并发症的研究多集中在周围神经系统,主要是糖

尿病引起的周围神经病变。近年来的研究表明糖尿病同样引起中枢神经系统并发

症,主要表现为糖尿病认知功能障碍(diabeticcognitivedysfunction)。

海马是边缘系统的一部分,主要与学习和记忆功能有关。糖尿病认知功能障

碍与高血糖导致的海马组织损伤密切相关。

但是高血糖导致的海马神经元损伤的分子机制复杂,至今尚未完全明确。因

此,探索高血糖导致的海马神经元损伤的具体机制对于预防糖尿病所致的认知功

能障碍和提升糖尿病患者的生存质量具有重大的意义。

钙离子(calciumion,Ca2+)是细胞内常见的第二信使之一,它参与了诸如增

殖、转录、胞吐、凋亡等细胞生理或病理过程。钙离子内流的主要通道包括电压

调控钙离子通道、受体激活钙离子通道和钙池调控的钙离子通道。

其中钙池调控的钙离子通道(store-operatedcalciumchannels,SOCs)是

包括神经元在内的多种细胞中钙离子内流的主要通道之一,它主要由基质相互作

用分子(stromalinteractionmolecule,STIM)和钙释放激活的钙通道蛋白

(calciumrelease-activatedcalciumchannelprotein,CRAR,也叫做Orai)

组成。STIM是一个定位在内质网膜上的单次跨膜蛋白,它的主要作用为监测内质

网腔中钙离子浓度。

而Orai主要构成了细胞膜上的钙离子通道。钙池调控的钙离子内流(store

operatedcalciumentry,SOCE)与钙平衡之间关系密切,当内质网中的钙离子浓

度降低,STIM转位到细胞膜从而激活Orai等构成的钙离子通道,促进钙离子内流

以提高内质网腔钙离子浓度,并为细胞浆补充钙离子。

近年来的研究表明SOCE参与了帕金森病、阿尔茨海默病等多种神经退行性

疾病的病理生理过程,其主要是通过调整SOCs开放频率和改变细胞内钙离子浓

度来实现的。然而,SOCE是否参与了高血糖导致的海马神经元损伤及认知功能障

碍,我们不得而知。

因此,本实验旨在通过高糖刺激原代培养的神经元细胞,研究SOCE是否参与

其中以及详细的作用机制。同时,本实验也通过链脲佐菌素(streptozocin,STZ)

诱导斯普拉格道利(SpragueDawley,SD)大鼠糖尿病模型,研究SOCE在糖尿病大

鼠海马组织损伤中的作用,并且通过体内外阻断SOCE观察其在缓解海马神经元

损伤中的效果,为深入研究高血糖导致的神经元损伤的分子机制和糖尿病认知功

能障碍的发病机制提供新的实验室基础。

第一部分：钙离子在高糖导致的神经元损伤中的作用目的：通过检测高糖刺

激之后神经元的损伤情况以及细胞浆中游离钙离子浓度(cytoplasmicfree

Ca2+concentration,[Ca2+]cyt),在此基础上给予细胞内外钙离子螯合剂后,再

次检测细胞浆中钙离子浓度以及神经元的损伤情况,探讨钙离子在高糖诱导的神

经元损伤中的作用。方法：1.细胞培养：取18天孕龄的SD孕鼠,按照常规步骤

取脑、剪碎、消化及计数后,将神经元接种于含Neurobasal+B27培养基且预先铺

有多聚赖氨酸(Poly-D-lysine,PDL)的6孔板或96孔板中,置于37℃、5%CO2

培养箱中培养。

每3天进行半量换液。2.细胞处理分组：原代培养的神经元常规培养后,分

组并给予不同浓度的葡萄糖(0、25mM、50mM、75mM、100mM)刺激48h。

各组分别为：正常对照组,高糖组,高糖+乙二胺四乙酸(ethylen