苯硫脲尝味的群体遗传学调查专家讲座.pptxVIP

苯硫脲尝味群体遗传学调查;1.试验目标;2.试验原理;图2.1苯硫脲结构图;2.2人类苯硫脲尝味基因

人类PTC尝味基因Homosapienstastereceptor,type2,member38(TAS2R38)(NM_176817)，又名PTC、T2R38或T2R61。绝大多数尝味者与味盲者区分在于三处单核苷酸多态性（singlenucleotidepolymorphisms，SNPs)：一处是145位，味盲者为G145（编码丙氨酸ala），尝味者为C145（编码脯氨酸pro）；第二处是785位，味盲者为T785（编码缬氨酸val），尝味者为C785（编码丙氨酸ala）；第三处于886位，味盲者为A886（编码异亮氨酸ile），尝味者为G886（编码缬氨酸val）。所以味盲者PTC多肽中三处对应氨基酸分别是ala49、val262和ile262，被称为AVI等位基因，而尝味者三处是pro49、ala262和val262，被称为PAV等位基因（图2.2，2.3）

;;;;味盲者PTC编码区有五个限制性内切酶Fnu4H1识别位点（识别序列5’-GC↓NGC-3’），假如是尝味者，则其第785位SNP恰好形成了一个额外Fnu4H1识别位点（GCTGC）。所以能够利用这个SNP造成限制性位点多态性，设计引物扩增包含785位SNP位点PTC基因编码区一部分，然后用Fnu4H1切割扩增产物，依据是否能把扩增产物切开而判定是某个人单倍型（haplotype）。;3.试验技术路线

;4.试验步骤

4.1讲解试验目标、试验原理、试验技术路线；试验方法及注意事项；主要仪器设备使用方法、注意事项；（提前一周讲解，给学生准备时间）

（1）讲解试验目标、试验原理、试验技术路线。

（2）讲解口腔上皮细胞总DNA快速提取、基因PCR扩增、DNA电泳、PCR产物纯化、DNA酶切、遗传学分析等试验方法及注意事项。

（3）讲解高压蒸气灭菌锅、高速离心机、小型瞬时离心机、电泳仪、水平电泳槽、涡旋振荡器、磁力搅拌器、电子天平、PCR仪、微波炉、紫外分光光度计、电磁炉、恒温水浴锅、恒温干热议、凝胶成像仪、制冰机、超净工作台、通风橱、恒温振荡摇床、37℃培养箱、pH计、微量移液器、冰箱、-80℃超低温冰箱等主要仪器设备以及必须电脑软件使用方法、注意事项；

;4.2PTC尝味能力测定

4.2.1试验材料

主要仪器设备

高压蒸气灭菌锅、磁力搅拌器、电子天平、超净工作台、恒温水浴锅、冰箱。洁净、经121℃高压灭???20min容量瓶、量筒、烧杯、螺口试剂瓶，一次性医用无菌PE手套、乳胶手套、塑料滴管，一次性纸杯，记号笔。

试剂和材料

（1）材料：受试者为全体修读遗传学大试验学生。

（2）试剂：苯硫脲（PTC）结晶，娃哈哈纯净水.

溶液配制

（1）原液（1号液）：称取PTC结晶0.65g，加娃哈哈纯净水500ml，在室温(20℃左右)下溶解l~2d（经常摇摆）（或60℃水浴中1h充分溶解），PTC浓度约为1／750，过滤灭菌。

（2）稀释液：用娃哈哈纯净水逐层稀释原液2~14倍，编为2-14号（表4.1）。将配好14种浓度PTC溶液，过滤灭菌，分别置于灭菌过100ml螺口试剂瓶中另取娃哈哈纯净水作为第15号液。

;;4.2.2试验方法

（1）让受试者正坐，仰头张嘴伸舌，用滴管滴2～3滴15号液于受试者舌根部，让受试者慢慢咽下重复咂嘴品味液体尝味，然后用纯净水做一样试验，交替给受试者尝味，防止受试者臆意猜测而影响结果准确。（2）问询受试者能否判别此两种溶液味道。

（3）若不能判别或判别不准，则依次用14~1号溶液重复试验，直到能明确鉴

别出PTC苦味为止。;（4）复尝味3次，3次结果相同时，才是可靠。

（5）统计所品出苦味液体编号和稀释浓度。

4.3人口腔上皮细胞总DNA提取

4.3.1试验材料

主要仪器设备

高压蒸气灭菌锅、磁力搅拌器、电子天平、超净工作台、恒温水浴锅、涡旋

振荡器、高速离心机、恒温振荡摇床、微量移液器、电磁炉、冰箱、-80℃超低

温冰箱、计时器、pH计。

洁净、经121℃高压灭菌20min量筒、烧杯、螺口试剂瓶、牙签、1.5mL

灭菌微量离心管、微量移液器吸头（枪头），离心管架，一次性医用无菌PE手

套、乳胶手套、口罩，记号笔。;试剂和材料

（1）材料：每试验小组选取1名受试者，用灭菌牙签刮取口腔上皮细胞。

（2）试剂：灭菌水，pH标准液，细胞基因组DNA提取试剂盒

4.3.2试验方法

（1）在1.5ml灭菌微量离心管中加入100μL灭菌水。

（2）受试者用无菌牙签轻