《葡萄组织培养技术》--脱毒培养.pptxVIP

葡萄组织培养与快繁技术;一、病毒种类

葡萄感染的病毒主要有卷叶病毒、栓皮病毒、扇叶病毒、黄脉病毒和斑点病毒等。;葡萄卷叶病;葡萄栓皮病;葡萄扇叶病;;无病毒苗的培育

和种植作为病毒病

防治的主要手段。;二、脱毒方法;

（２）茎尖培养脱毒

将感染病毒的植株在5℃下冷藏保存，以后在温度25℃、相对湿度80%、每日16h光照的条件下水培，长出的新芽剥离切取带１～３个叶原基0.2~0.3mm茎尖进行离体培养，即可获得脱毒苗。

;3.热处理结合茎尖培养

对盆栽葡萄苗先进行热处理，再剥取茎尖培养。或

者剥取茎尖后，接种于培养基，进行高温培养。;三、无病毒苗的鉴定;电子显微镜检测法：运用电子显微镜可直接检测待检植物体内有无病毒粒体存在。

指示植物法：将一些对病毒反应敏感、症状特征显著的植物，用以检验待测植物体内特定病毒的存在。

;四、快繁技术;２.培养条件

茎尖分化与继代培养采用相同的固体培养基1/2MS+6-

BA0.5mg/L+LH100mg/L+NAA0.01mg/L+GA0.2mg/L，2%

的蔗糖，0.6%的琼脂，pH5.8。

生根培养

1/2MS+IAA0.4mg/L+NAA0.05mg/L+IBA0.1mg/L。

培养室温度25±2℃，光照度1000lx，16h的光照。;3.生长与分化

接种成活的茎尖在一个月左右开始分化出芽和侧芽，两

个月左右形成芽丛，即可进行大量增殖。每月继代一

次，每个芽丛切成10个。;５．试管苗的移栽

待试管苗长出完整的根系和5-7片新叶时，把瓶子移入温

室中，即可打开培养瓶。

历时7天，把苗从试管中取出，洗去培养基，栽于经过干

热灭菌处理的蛭石内，盘上用塑料薄膜罩严，置于散射日光

下，20℃的温度，自然湿度的条件下，锻炼15d。;胚胎形成和植株体形成;幼苗形成及二次分化苗的构建;诱导叶片分化愈伤组织，受病毒影响胚状体发生改变;组培中为什么会出现褐变现象？如何解决？;褐变是指外植体在培养过程中体内的多酚

氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化

成棕褐色的醌类物质，这种致死性的褐化

物不但向外扩散使培养基逐渐变成褐色，

而且还会抑制其它的活性，严重影响外植

体的脱分化和器官分化，最后褐变而死亡

的现象。;二、褐变的影响因素;3.培养基成???

无机盐浓度过高会使某些观赏植物的褐化程度增加；细胞分裂素水平过高也会刺激某些外植体的多酚氧化酶的活性，从而使褐化现象加重。

4.培养条件不当

如果光照过强、温度过高、培养时间过长等，均可使多酚氧化酶的活性提高，从而加速培养材料的褐化程度。

5.其它原因;三、褐变的解决措施;组培中为什么会出现玻璃化现象？如何解决？;一、玻璃化的含义;二、玻璃化苗的症状表现;三、引起试管苗玻璃化的原因;1.适当控制培养基中无机营养成分

2.适当提高培养基中蔗糖和琼脂的浓度

3.适当降低细胞分裂素和赤霉素的浓度

增加生长素的比例。;