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临床实验室常用试剂配制标准操作程序

一、目的：

保证实验中用到的各种试剂符合实验要求。

二、适用范围：

实验室常用需要配制的试剂。

三、职责：

由临床基因扩增检验实验室专业技术人员制定程序文

件，实验室负责人审核，科室主任批准实施。

四、程序：

1、4％NaOH溶液配制

⑴用电子天平称取4克分析纯的NaOH固体，置于一只三

角烧瓶中。

⑵用200ml量筒准确取100ml水，缓缓注入盛放NaOH固

体的三角烧瓶中。

⑶摇荡三角烧瓶使NaOH固体充分溶解。

⑷然后缓缓倾倒入250ml广口瓶中密封保存备用。

2、1％NaClO溶液配制

⑴用5ml量筒准确取2mlNaClO原液，缓缓注入一只三角

烧瓶中。

⑵用200ml量筒准确取198ml水，缓缓注入盛放NaClO的

三角烧瓶中。

⑶摇荡混匀溶液。

⑷将混匀的溶液转移入广口瓶中。

⑸重复⑴～⑷步的操作，制备1000ml的1％NaClO溶液储

存备用。

3、10％NaClO溶液配制

⑴用100ml量筒准确取20mlNaClO原液，缓缓注入一只三

角烧瓶中。

⑵用200ml量筒准确取180ml水，缓缓注入盛放NaClO的

三角烧瓶中。

⑶摇荡混匀溶液。

⑷将混匀的溶液转移入广口瓶中。

⑸重复⑴～⑷步的操作，制备1000ml的10％NaClO溶液

储存备用。

4、1NHCl溶液配制

⑴用100ml量筒准确取86.2ml浓盐酸，缓缓注入一只三

角烧瓶中。

⑵用1000ml量筒准确取913.8ml水，缓缓注入盛放浓盐

酸的三角烧瓶中。

⑶摇荡混匀溶液。

⑷将混匀的溶液转移入广口瓶中储存备用。

5、RNA专用试剂配制

1）RNA提取器皿的处理

①提取过程尽量使用一次性塑料制品,并经高压消毒.因为

其基本不含Rnase,可以不经预处理直接用于制备和储存

RNA。

②如须使用玻璃制品.使用前必须经180℃干烤8小时以上,

或用0.1%DEPC溶液浸泡。

③不能用高温干烤的用品均须用0.1%DEPC溶液浸泡。

④DEPC去除Rnase步骤:灌满0.1%DEPC的器皿在37℃放置

2小时,然后用灭菌水淋洗数次,并于100℃干烤，15分

钟.最后高压消毒15分钟。100℃干烤15分钟待用。

2）DEPC水（无Rnase水）配制

①量取一定量的超纯水（18.2MΩ）

②量取0.1%（v/v）的DEPC。加入水中。

③水放置过夜。

④高压蒸汽灭菌15分钟。

3）75%DEPC乙醇配制

①准备无Rnase的量筒及玻璃瓶。

②按3:1比例分别量取RNA专用的无污染的无水乙醇和

DEPC水,倒入容器内。

③混匀,即为75%DEPC乙醇

3）RNA试剂的准备

①所用RNA试剂均须为提取RNA专用,不可与其它用途的

试剂混用,以免污染.

②称量RNA试剂时,其所用的药勺、容器、量筒等均应为

无Rnase污染器皿。

③配制用水为高压灭菌超纯水（最好用DEPC处理过的超

纯水）。

④在配制过程中应戴一次性手套,并须勤换。.

⑤如试剂内不含能与DEPC反应的成分,配好的溶液可用

0.1%DEPC于37℃处理至少12小时,然后于100℃加热15

分钟或高压灭菌15分钟。

⑥RNA试剂使用时,应将大瓶试剂按实验需要量倒入小的

容器或离心管中,避免储藏液污染。