健康人（异体）免疫细胞（CIK）的 制备技术和应用规程.pdf

健康人（异体）免疫细胞（CIK）的制备技术和应用规程

1范围

本文件规定了CIK免疫细胞的制备技术规程。

本文件适用于人免疫细胞的生产、运输、存放。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用

文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）

适用于本文件。

YY0572-2015《血液透析及相关治疗用水》

YY0598-2006《血液透析及相关治疗用浓缩物》

T/CGCPU019—2022《免疫细胞产品供者材料管理要求》

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

免疫细胞产品immunecellproducts

经过体外分离、培养、扩增后制成的人源活免疫细胞

3.2

供者donor

用于免疫细胞产品（3.1）采集、制备的细胞的来源是人

3.3

供者材料suppliermaterials

从供者外周血，脐带血获得的用于免疫细胞产品生产的免疫细胞。

3.4

生物安全biosafety

细胞的采集和制备处于没有危险和不受生物因子及相关因素威胁的状态.

1

4仪器设备条件和细胞培养器材

4.1仪器设备条件

4.1.1场地条件：

（1）GMP千级净化室（百级超净工作单元）100-300M，2

（2）普通实验室（质量检测）50-100M，2

（3）洗涮、准备间200-500M2

4.1.2大型设备：

（1）血细胞分离机（单采机）

（2）流式细胞仪

（3）酶标分析仪

（4）内毒素检测仪

（5）常速，超速离心机

（6）常温，低温冰箱（柜）

（7）图像仪器，倒置显微镜

4.2细胞培养器材

4.2.1清洗与消毒

4.2.1.1玻璃器皿的清洗

清水浸泡——洗衣粉刷洗——自来水冲洗——晾干，浸酸过夜——自来水冲洗10次以上——蒸

馏水洗2-3次——烘干，包装——灭菌，贮存备用。

4.2.1.2培养板和培养瓶

用符合国家标准规定的商售一次性使用培养瓶，袋物品。

4.2.1.3载玻片用一次性使用的物品。

4.2.1.4胶塞的清洗。

自来水浸泡——2%NAOH煮沸1020分钟——自来水冲洗——1%稀HCL浸泡30分钟——自来水

~

冲洗——蒸馏水冲洗23次——晾干，备用。

~

4.3灭菌

4.3.1使用前，先检查高压灭菌器主体内水位是否超过电热管。

4.3.2在加热开始时，放气阀垂直，使空气随加热由桶内逸出。待有较急的蒸汽喷出时，即将放气

阀拨回水平位置。

4.3.3瓶皿121-126℃15MIN;器械121-126℃10MIN;橡胶121℃15MIN;溶液121-126℃20-40MIN

4.3.4当压力到达所需的范围时，开始计算时间。124-126℃灭菌时，安全阀能使之维持恒压；低

于124℃时，则应在蒸汽压力到达所需范围时，适当调节开关使之维持恒压。

2

4.3.5灭菌完，要迅速使之干燥者，将灭菌器内的蒸汽通过放气阀迅速排出。等压力为0时，再稍

等1-2分钟，然后将盖打开，继续加热10-15分钟，使物品上残留的水蒸汽得到蒸发，随后关掉；

灭菌液体时，应将液体灌装在玻璃瓶中，以不超过3/4体积为好，瓶口用棉花纱布塞好，并用绳子

扎在瓶颈上，使瓶内的空气能自然泄出，而又不致使瓶塞落入瓶内。灭菌完，先关电源，等压力为

0时，再稍等几分钟，打开放气阀，排出余气后，才能将盖开启。

5细胞培养操作技术

5.1洗液的配制

重铬酸钾先溶于水中，然后，将浓硫酸缓慢加入。

[强液]重铬酸钾63G，浓硫酸1000ML，蒸馏水200ML

「常用」重铬酸钾63G溶于800ML蒸馏水,再缓慢加入浓硫酸1000ML.

「本室」重铬酸钾120G：浓硫酸200ML：蒸馏水1000ML

5.2细胞培养液

5.2.1商售一次性应用的完全培养液：1640完全培养液。

5.2.2配置：1640干粉