一种快速定量检测猴组织中SIVSHIV的方法.pptxVIP

一种快速定量检测猴组织中SIVSHIV的方法汇报人：2024-01-31

引言方法原理与技术路线实验操作过程详解结果分析与解读策略方法性能评估及比较研究实际应用案例分享与讨论总结与展望contents目录

01引言

猴组织中SIV/SHIV感染的严重性SIV/SHIV感染在猴类实验模型中具有重要意义，对于研究人类艾滋病病毒（HIV）的感染机制、疫苗研发和抗病毒药物筛选具有关键作用。快速定量检测的需求传统的SIV/SHIV检测方法通常耗时较长、灵敏度有限，无法满足快速定量检测的需求。因此，开发一种快速、准确、灵敏的定量检测方法对于SIV/SHIV研究具有重要意义。背景与意义

SIV（SimianImmunodeficiency…即猴免疫缺陷病毒，是一种感染非人灵长类动物的逆转录病毒，与HIV在遗传和生物学特性上具有相似性。要点一要点二SHIV（Simian-HumanImmunodef…即猴-人免疫缺陷病毒嵌合体，是通过基因工程技术将SIV和HIV的基因片段进行重组而得到的嵌合病毒，用于模拟HIV在人类体内的感染过程。SIVSHIV简介

传统病毒分离培养法虽然可以直接检测到病毒颗粒，但操作繁琐、耗时较长，且对实验条件和操作人员技能要求较高。分子生物学检测方法如聚合酶链式反应（PCR）等，虽然具有较高的灵敏度和特异性，但可能受到样本中抑制物的影响，导致假阴性结果的出现。此外，PCR方法还需要昂贵的仪器设备和专业的操作人员。其他新兴技术如基因芯片技术、高通量测序技术等，虽然具有高通量、高灵敏度的优势，但目前仍处于研究阶段，尚未广泛应用于实际检测中。血清学检测方法如酶联免疫吸附试验（ELISA）等，虽然操作简便、快速，但可能受到抗体交叉反应等因素的干扰，导致结果不准确。现有检测方法及其局限性

02方法原理与技术路线

本方法采用实时荧光定量PCR技术，针对SIV/SHIV病毒特异性序列设计引物和探针，通过荧光信号的实时监测和定量分析，实现对猴组织中SIV/SHIV病毒的快速定量检测。基于实时荧光定量PCR技术实时荧光定量PCR技术具有高灵敏度和高特异性的特点，能够有效避免假阳性和假阴性的出现，确保检测结果的准确性和可靠性。高灵敏度和高特异性方法原理介绍

技术路线及关键步骤反转录合成cDNA以提取的病毒RNA为模板，在反转录酶的作用下合成cDNA。病毒RNA提取采用专用的病毒RNA提取试剂，从处理后的样本中提取病毒RNA。样本处理取适量猴组织样本，进行研磨和匀浆处理，释放病毒颗粒。实时荧光定量PCR扩增以合成的cDNA为模板，加入特异性引物和探针，进行实时荧光定量PCR扩增。结果分析与判定根据荧光信号的实时监测和定量分析，判断样本中是否含有SIV/SHIV病毒，并给出具体的病毒载量。

试剂选择选用高质量的病毒RNA提取试剂、反转录酶、实时荧光定量PCR扩增试剂等，确保实验结果的准确性和可靠性。仪器选择选用高灵敏度的实时荧光定量PCR仪，具备高分辨率和高通量的特点，能够满足大量样本的快速检测需求。同时，还需配备研磨器、匀浆器、离心机等辅助设备，以完成样本的前处理工作。试剂与仪器选择依据

03实验操作过程详解

123选择适当部位，如淋巴结、脾脏等，进行无菌采集。采集猴组织样本将采集的组织样本剪碎，加入适量的生理盐水或PBS缓冲液，用匀浆器匀浆处理。样本处理将处理后的样本分装至冻存管中，标记清楚，并置于-80℃超低温冰箱中保存备用。保存条件样本采集与处理方法

裂解细胞取出适量处理后的样本，加入裂解液和蛋白酶K，充分混匀后，在56℃水浴中裂解细胞。核酸提取将裂解后的样本加入核酸提取试剂中，按照说明书操作进行核酸提取。纯化核酸使用纯化柱或磁珠等纯化方法，去除杂质，得到纯净的核酸样本。核酸提取与纯化步骤030201

加样将提取纯化的核酸样本加入PCR反应管中，再加入适量PCR反应液，充分混匀。实时荧光定量PCR仪检测将PCR反应管放入实时荧光定量PCR仪中，设置合适的反应程序，进行PCR扩增和荧光信号检测。配制PCR反应液按照实时荧光定量PCR试剂盒说明书，配制PCR反应液，包括引物、探针、dNTPs、缓冲液等。实时荧光定量PCR反应体系建立

04结果分析与解读策略

对实验过程中产生的原始数据进行整理，包括样本信息、检测信号值等，确保数据的完整性和准确性。原始数据整理为了消除实验操作中可能存在的批次效应和样本间差异，对原始数据进行标准化处理，如使用内参基因进行校正等。数据标准化处理采用图表结合的方式展示实验结果，如绘制散点图、柱状图等，直观反映样本中SIV/SHIV的病毒载量情况。结果展示方式数据处理及结果展示方式

参照国际通用标准参考国际通用的SIV/SHIV检测阳性判断标准，结合实验数据和临床需求，制定适合本实验的阳性判断标准。统计学分析通过