(1.30)--实验 9 拟南芥的水培和生长发育观察.ppt

实验九拟南芥的水培和生长发育观察实验目的设计、制作一套拟南芥溶液培养装置，并从种子萌发开始，观察拟南芥种子萌发、植物生长、开花结果的过程，并收获下一代种子。实验原理拟南芥为十字花科拟南芥属植物，以其个体小、生长周期短以及基因组小等优点成为植物生理和分子生物学研究的重要模式植物。溶液培养可精确控制营养成分和培养因子，植物同步性好；同时，对植物各部分的观察分析也更方便，也有利于分析在生长发育过程中植物对营养条件、环境因子以及病虫害等胁迫信号的反应。实验器材和试剂植物材料拟南芥种子（哥伦比亚野生型）实验器材1L试剂瓶10个，培养室，水培盒，天平，容量瓶，烧杯，移液管，棕色1.5ml离心管，保鲜膜，脱脂棉等。实验试剂2-吗啉乙磺酸(MES)，Hoagland培养液，5mol/LKOH实验步骤培养液的配制首先按实验指导书p188表7-9和表7-10配制各种母液，每种母液配1L。高压灭菌后于试剂瓶中保存。配制1份即可。配制0.5×Hoagland培养液(1L)：取1L大烧杯，预先放入800ml蒸馏水，加入MES0.5g，溶解后，依次加入母液I2ml；母液II2ml；母液III1ml；母液IV2ml；母液V1ml；母液VI0.2ml；微量元素母液0.5ml；Fe-EDTA母液4ml。用5mol/LKOH将pH调至5.8-6.0，最后定容至1L。3、培养盒的准备每组1个培养盒和8个1.5ml的棕色离心管，用锋利的刀片在离底部1.5cm处切去底部以及盖子；并用脱脂棉（揉成柱形棉球）塞入离心管中，棉球上部与离心管上端齐平或稍低，将8个处理好的离心管分散均匀插入培养盒内。4、播种与春化取0.5×Hoagland培养液150ml稀释到300ml，倒入培养盒内，作好液面标记，待棉球表面湿润后取2粒种子放置于离心管的棉球表面，共16粒种子。加盖加保鲜膜于4℃冰箱内黑暗春化3天。5、植物培养将春化后的材料从冰箱中取出，转移至21℃长光照（16h/8h）培养，3天后揭去保鲜膜，保持原有培养液体积，培养6、7天后换为0.5×Hoagland培养液300ml，并打开盖子继续培养。10-12天后，根长出，4-5周后即可收取种子，完成拟南芥整个生长发育过程。这一过程中，每7天换一次0.5倍的培养液，并及时补充失去的水分。实验结果观察拟南芥整个生长发育过程中莲座叶的数目变化，开花时间以及种子收获时间。思考题1、配制培养液时，为什么要先加水再加各种母液？2、本培养装置合适培养什么样的植物类型？