Native-PAGE实验方法与问题及其解答-主要内容-分离酸性蛋白步骤.docx

Native-试验方法与问题及其解答

主要内容：分别酸性蛋白步骤分别碱性蛋白步骤问题和解答步骤

主要内容：

分别酸性蛋白步骤

分别碱性蛋白步骤

问题和解答步骤

非变性聚丙烯酰胺凝胶和变性sds-电泳在操作上根本上是

一样的，只是非变性聚丙烯酰胺凝胶的配制和电泳缓冲液中不能含有变性剂如SDS等。一般蛋白进展非变性凝胶电泳要先分清是碱性还是酸性蛋白。分别碱性蛋白时候，要利用低pH凝胶系统，分别酸性蛋白时候，要利用高pH凝胶系统。酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中承受的pH是8.8的缓冲系统，蛋白会带负电荷，蛋白会

相阳极移动；而碱性蛋白通常电泳是在微酸性环境下进展，蛋正电荷，这时候需要将阴极和阳极倒置才可以电泳。

酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中承受的pH是8.8的缓冲系统，蛋白会带负电荷，蛋白会相阳极移动；而碱性蛋白通常电泳是

在微酸性环境下进展，蛋正电荷，这时候需要将阴极和阳极倒置才可以电泳分别酸性蛋白。

分别酸性蛋白

分别酸性蛋白

工作液配制

1.40%胶贮液(Acr:Bis=29：1〕；

4×分别胶Buf(1.5MTris-HCl，pH8.8)：18.2gTrisbase

溶于80ml水，用浓HCl调pH8.8，加水定容到100ml，4℃贮存；

4×积存胶Buf(0.5MTris-HCl，pH6.8)：6gTr